选修1 专题2 微生物培养与应用.ppt

一、微生物的分离与培养 1．培养基的概念：指按照微生物对营养物质的不同需求，配制的供其生长繁殖的营养基质。包括 、半固体培养基和 。 2．培养基的营养构成：各种培养基的基本配方一般都有水、碳源、氮源和无机盐。 3．培养基的制备：计算→称量→ →灭菌→ 。 4．无菌技术，主要指消毒和灭菌。 (1)实验室中常用紫外线或化学药物消毒，如用 擦拭双手。 (2)灭菌的方法主要有 灭菌、干热灭菌和 灭菌。 (3)实验操作应在 环境中进行，例如酒精灯火焰旁。 5．实验操作 (1)倒平板操作：待培养基冷却至 左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。 (2)平板划线法是指通过接种环在琼脂固体培养基表面 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 (3)稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列梯度稀释后涂布平板，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的 。 (4)应用选择培养基分离某种特定的微生物：选择培养基是指允许特定种类的微生物生长，同时 其他种类微生物生长的培养基。 二、微生物的鉴定及数量的测定 1．每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均 ，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。 2．鉴定分解尿素的细菌的方法：在以 为唯一氮源的培养基中加入 指示剂，指示剂若变红说明该种菌能分解尿素。 3．鉴定纤维素分解菌的方法：利用 染色法，如果培养基中出现 ，则说明很可能含有纤维素分解菌。 4．纤维素分解菌的筛选原理：刚果红可以与 等多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的 发生这种反应。 5．土壤中纤维素分解菌的分离的实验方案 (1)土壤取样：采集土样时，应选择富含纤维素的环境。 (2)选择培养：称取土样20 g，在无菌条件下加入装有30 mL培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下振荡培养1～2 d，直至培养液变浑浊。选择培养的目的是增加纤维素菌浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。 (3)梯度稀释：依次将培养液稀释101～107倍。 (4)将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上，30 ℃倒置培养。 (5)挑选产生透明圈的菌落，即为分解纤维素的菌落。 思考辨析 1．判断下列关于微生物分离培养说法的正误。 (1)培养基分装到培养皿后进行灭菌(2013年高考江苏卷)(×) (2)据物理状态的不同，培养基只有液体培养基和固体培养基两种类型(×) (3)在配制培养基时，除满足营养需求外，还应考虑pH、O2及特殊营养物质的需求(√) (4)培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种成分(√) (5)筛选分解尿素的细菌应以尿素作为培养基中的唯一氮源(√) (6)统计样品中的活菌一般使用平板划线法(×) 2．判断下列关于微生物的鉴定及数量测量的测定正误。 (1)将转基因植物的叶片接种到无菌培养基上，应该进行严格的无菌操作(2012年高考北京卷)(√) (2)将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上分离分解尿素的细菌，是否无菌操作影响较小(2012年高考北京卷)(√) (3)土壤中纤维素分解菌的筛选流程中的“选择培养”是必不可少的(×) (4)在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入刚果红染色剂，若出现透明圈，则说明筛选到分解纤维素的细菌(√) (5)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则说明筛选到分解尿素的细菌(×) (6)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素(√) 1．培养基的成分 2.培养基的分类 3.培养基的配制原则 (1)目的要明确：根据微生物的种类、培养目的等选择原料配制培养基，如培养自养型的微生物就不用加入有机营养物质。 (2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。 (3)pH要适宜：各种微生物适宜生长的pH范围不同。 4．培养基的制备 牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备： [特别提醒]　不同生物需要的营养物质不同 (1)微生物需要的营养成分有水、无机盐、碳源、氮源，有些微生物还需要特殊营养物质，如生长因子。 (2)在人和动物中，营养物质包括水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类。 (3)在植物中，营养物质包括矿质元素、水、二氧化碳三类。 5．无菌技术操作的方法 (1)灭菌的方法与原理 ③酒精灯灼烧法：适用于操作时试管口及接种环的灭菌。 以上三种高温灭菌的原理是使细菌体内蛋白质变性而达到杀灭细菌的目的。 (2)消毒的方法 ①煮沸消毒法：100 ℃煮沸5～6 min可以杀死微生物细胞和一部分芽孢，可用于培养器皿的消毒。 ②巴氏消毒法：在80 ℃煮15 min或在70～75 ℃煮30 min，实际生产中常用于