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腺病毒介导的PTEN基因治疗肺癌的实验研究 中文提要 结论：成功构建了含PTEN基因的重组腺病毒载体Ad．PTEN，酶切鉴定与预期 结果相符，TCID50法测定病毒滴度为1．0X 1010pfu／ml，为下一步体内外实验证实PTEN 对肺癌的抑制作用研究打下基础。 第二部分： 目的：探讨Ad-PTEN对肺癌细胞株A549的体外杀伤作用及机制 病毒Ad．PTEN感染细胞后形态的变化；应用RT-PCR、Westernblot检测Ad．PTEN 率的变化；应用透射电镜观察外源性PTEN对A549细胞超微结构的影响。 结果： 生长，贴壁能力减弱，细胞形态变圆，体积缩小，折光性增强，而Ad．LacZ组及PBS 组细胞正常生长；Ad-PTEN转染A549细胞后应用RT-PCR检测到PTENmRNA的表 细胞；MTT实验证实，外源性PTEN基因转染显著抑制了A549细胞的增殖，并随着 时间的延长其抑制率增强，而Ad--LacZ转染组则无明显的抑制作用；转染Ad— 基因组细胞则呈典型凋亡征象，细胞膜完整，核染色质边集。 细胞的生长增殖。诱导A549细胞凋亡，是PTEN基因抑制肺癌细胞增殖的主要作用 机制之一。 第三部分： 目的：探讨Ad—PTEN对裸鼠肺癌种植瘤体内杀伤作用及机制 X u PBS空白对照组，Ad．PTEN、Ad．LacZ组分别以5l直接注射至肿瘤内， 108pfu／50 PBS组以50p1直接注射至肿瘤内，隔日1次×5次，观察肿瘤体积的变化，最后l II 腺病毒介导的PTEN基因治疗肺癌的实验研究 中文提要 次治疗后3天处死裸鼠，取肿瘤标本称重，行肿瘤病理学、治疗组裸鼠肝脏常规病理 检查、原位凋亡染色、电镜肿瘤组织观察及免疫组化染色，检查基因治疗后裸鼠肿瘤 病理变化。 结果：应用Ad．PTEN腺病毒液对人肺腺癌的裸鼠种植瘤动物模型进行瘤内注射， 与对照组相比，治疗组肿瘤生长明显减慢，肿瘤体积较对照组明显缩小；同对照组肿 瘤相比，治疗组肿瘤组织HE染色见有大片空泡变性区，部分肿瘤细胞消失，并可见 散在的纤维细胞及炎性细胞，取肝脏组织病理检查未发现有异常改变；原位凋亡染色 法检测肿瘤组织，发现治疗组凋亡细胞明显增多；治疗组肿瘤组织的透射电镜观察， 发现肿瘤组织呈灶性坏死，肿瘤细胞核固缩，并见大量凋亡小体；此外还发现，外源 则下调。 结论： Ad—PTEN治疗能明显抑制肿瘤的生长，疗效显著，未发现有明显毒性反 用机制之一。 关键词：肺癌；基因治疗；PTEN；腺病毒 作 者：徐中华 指导教师：钱海鑫 III ＼、、 on for Carcinoma Studies Lung ExperimentalTherapy Vector PTENGeneMediatedAdenovirus by by Abstract