区域草鱼呼肠孤病毒引发出血病的风险评估与研究.pdfVIP

草鱼呼肠孤病毒引发出血病的风险评估研究 摘要 草鱼出血病是一种发病率高、致死率高、严重危害当年草鱼种及 二龄草鱼的病毒性疾病，其病原为草鱼呼肠孤病毒。引发草鱼出血病 的因素很多，为了消除或降低该病发生的可能性或者减少其发生时造 成的损失，本研究以江西省南昌市及周边地区为基点，从该地区草鱼 出血病病原的分离与鉴定着手，通过调查该地区草鱼出血病流行情况、 实验室模拟试验确定该病发生风险因素，借助层次分析法明确不同风 险因素对该病发生的权重值，即要确定不同风险的优先次序或等级， 最后利用综合评分法建立该病发生风险模型。 1．收集江西南昌地区患典型草鱼出血病的病鱼组织，进行超薄切 片电镜观察，结果显示，在脾、肾样品中发现大量病毒颗粒，病毒无 囊膜，近球形，直径约70nm，形态与己报道的草鱼呼肠孤病毒(Grass Reovirus，GCRV)相似。取病鱼肌肉、内脏研磨，组织液经离心、 Carp 过滤除菌后进行鱼体人工感染试验和细胞感染实验。结果发现，人工 感染试验鱼出现死亡，且具有典型出血症状；组织滤液感染草鱼肾脏 细胞(CIK)后，盲传六代未观察到典型细胞病变效应，但感染细胞固 定后经超薄切片电镜观察，细胞质内有大量病毒存在，与病鱼组织切 片观察到的病毒形态一致。十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳 因组由11条dsRNA组成，呈现水生呼肠孤病毒基因组典型特征，但基 因组带型与GCRV 上己提交的草鱼呼肠孤病毒S6序列(GQ896337)设计特异引物，以 JX一0902株的cDNA作为模板，可扩增出特异性条带。S6序列聚类分析 结果显示，jx一0902与GCRVHZ08株、GDl08株S6同源性高达98％、 99％，该分离株应为草鱼呼肠孤病毒。 2．为了确定江西南昌地区草鱼出血病发生的风险因素，本人采用 调查问卷及定点观测的方法对南昌及周边地区进行了流行病学调查。 结果发现： (1)无论是当年草鱼种，还是二龄草鱼，未免疫池塘发病率均远 高于免疫池塘。 (2)从时间分布上看，草鱼出血病一般发生在5月---．10月份， 早的发生于四月下旬，晚的会持续到11月上旬。从风险主体上看，二 龄草鱼从5月份开始发生出血病，温度在25℃左右，集中在6、7月 份，30℃以上呈暴发状态；一龄草鱼从7月中下旬开始发生，温度在 30℃以上，集中在8、9月份，10月份常与细菌性烂鳃病并发。 (3)草鱼出血病一般发生在体长在7～15cm规格的草鱼上，集中 在9～12cm规格的草鱼上。 一． (4)水体理化因子溶氧、分子态氮、亚硝酸盐、透明度、pH等 与出血病有密切的关系。出血病是这些因子综合作用的结果。分子态 氮、亚硝酸盐、溶氧、透明度、pH值等的变化将影响出血病的发生迟 早、病情轻重和流行期长短。 (5)出血病与池塘使用年限及养殖模式也有关系。使用年限较长 (如10年)、养殖密度较高、草鱼占混养比例较大，高温季节投料过 多，患出血病的可能性较大。 3．为了明确一些因素如草鱼体长、温度、水质指标等不同水平对 出血病病情的影响，本文设计了相应的模拟试验，利用最小显著极差 法(LSR法)进行了统计分析，主要试验结果如下： (1)草鱼呼肠孤病毒JX-0902(组织浆液)感染不同规格的受试 草鱼时，受试草鱼的平均病程及死亡率有极显著差异，病情随体长的 增加而减轻，按死亡率由高到低排列，依次为(9±0．5)cm、(11± O．7)am、(13±O．7)cm、(15±O．7)am。 细胞液、jx一0902组织浆液对体长(12±1)am的草鱼进行攻毒试验， II 上海海洋大学硕士学位论文 仅JX一0902组织浆毒试验组出现死亡。 (3)以一定的浓度梯度进行攻毒试验，浓度低的试验组病程较长， 死亡率较低。 (4)用毒株来源及浓度不同的疫苗免疫试验草鱼，以JX一0902 组织浆液进行人工感染试验，发现同源性较高的毒株的免疫效果最好， 疫苗浓度较低时，免疫效果较差。 (5)温度对受试草鱼病情影响达极显著水平(PO．01)，试验组 ±1)℃，(18±1)℃。对照组未出现死亡。 (6)变温试验证明在一定温度范围内升高温度能加剧病情，降低 温度可以缓解病情。