嗜热菌分子分类方法及适应性机制的初步与研究.pdf

摘 要 摘要 微生物是地球上最大的生物资源宝库，嗜热微生物作为其一个重要的组成部 分，由于生长环境的极端特殊性，使得它们具有了一套独特的酶系统和防御机制 来适应这种对大多数生物来说是难以生存的环境。它们细胞和酶蛋白独特的耐热 性和与之相适应的分子结构，使之成为了人们开发利用的重要生物资源，从中分 离和提取的新颖工业酶和其他生物活性物质在基因工程、蛋白质工程、发酵工程 及矿产资源的开发利用上均有很大的应用价值。更为重要的是，嗜热微生物在生 物系统进化中具有特殊地位，蕴涵着生命进化历程的丰富信息，对其环境适应性 机理等生理特征的研究，将对研究生命的起源，进而揭示生命现象的本质具有重 要的意义。 本文从厦门周边地区温泉采集得到样品，在75C干1180℃的温度下进行培养 并分离得到60株嗜热菌。由于传统上微生物主要依靠培养和生化等表型特征进 行分类鉴定，较为烦琐。为了从大量的菌株中筛选出不同的菌株，有效的简化筛 16S．23S rDNA间隔区比较分析等分子生物学方法从中筛选得到7株种属不同的 嗜热菌，并进一步运用16SrDNA序列分析鉴定其种属关系，为进一步研究奠定 了基础。 由于嗜热菌的最适生长温度比较高，因此其对环境温度变化的适应性不仅对 其生存、生长至观重要，而且对于研究其与常温菌等其他微生物的关系，进而解 开生命进化之谜具有重要意义。在筛选乎导到的菌株中，我们选取了WH一10作为 进一步的研究对象，运用随机引物PCR技术(Random PCR， arbitrarilyprimed 下基因表达的差异。通过对RAP．PCR优化，差异基因筛选的阳性率得到了极大 地提高。在筛选到的53个差异片段中，我们选取了35个差异片段进一步用 Northern Not进行验证，其中有18个差异基因证实在转录水平上存在着表达差 异。这些基因主要涉及细胞膜表面结构的改变、转录调控以及生理代谢的适应性 调整，比较全面的反映了嗜热微生物对低温环境整体的适应性，．将有助于阐明嗜 热微生物对环境温度的适应性机制。 一摘 要 458 通过对质粒进行序列测定我们得到contig243、contig245、contig265和config blot验证的基 等4个DNA片段。在进一步的序列分析、PCR扩增以及Southem 础上，初步判定该菌携带有两个质粒，contig265组成pS4C，而contig 身复制所需要的replication G：T-mismatchendonuclease、C一5 DNA 相关的基因(如DNA repair cytosine—specific 因。进一步的测序分析将使我们获得质粒全序列，同时也将为我们阐明质粒上的 基因功能，从而帮助我们了解质粒与嗜热菌宿主的关系。此外，对嗜热菌质粒改 造的进一步研究正在进行之中。 关键词：嗜热菌；分类鉴定；RAP—PCR；差异表达基因；质粒 Abstract isthemostabundant resourceonthe Microorganism biology earth，and isoneof of thermophile the membersit．These have important