DNA与RNA提取方法.docVIP

实验三 Trizol法提取细菌总RNA 一、实验原理 Trizol主要物质是异硫氰酸胍,它可以破坏细胞使RNA释放出来的同时,保护RNA的完整性。加入氯仿后离心,样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后RNA 可以通过异丙醇沉淀来还原。无论是人、动物、植物还是细菌组织Trizol法对少量的组织(50-100 mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≧1 g)和细胞(107)均有较好的分离效果。Trizol试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。Trizol抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。 主要试剂和器材 Trizol 溶液 氯仿 异丙醇 75%乙醇 0.1% DEPC水 超净工作台 2.0 mL离心管无Rnase 移液枪 紫外分光光度计 石英比色皿 泳槽和模具 电泳仪 凝胶成像系统 大肠杆菌 实验步骤  一. 采用 Trizol 溶液提取细菌的总 RNA 挑取大肠杆菌菌单菌落培养至稳定期取菌液 2.0 mL 于2.0 mL离心管离心得菌体 2、 每管加入 1 mL Trizol 溶液盖紧管盖激烈振荡15 s室温静置5 min 4℃12000 g离心 10 min取上清转入(约 1 mL)新的 2.0 m L离心管中 每管加入 0.2 mL