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课文实验部分--必修1-3
实验二 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质(必修1一P18)
一.实验目的: 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质
二.实验原理:某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物,产生特定的颜色反应。
1.可溶性还原糖(如 )Cu 2O沉淀。
2.脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成 色(或被苏丹Ⅳ染液染成 色)。淀粉遇碘变蓝色。
3.蛋白质与双缩脲试剂发生作用,产生 色反应。
三.实验材料
1.做可溶性还原性糖鉴定实验,应选含糖高,颜色为白色的植物组织,如苹果、梨。(因为组织的颜色较浅,易于观察 的颜色。)
2.做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子,以花生种子为最好,实验前一般要浸泡3~4小时(也可用蓖麻种子)。
3.做蛋白质的鉴定实验,可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。
四、实验试剂
斐林试剂(包括甲液:质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液:质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液)、苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、双缩脲试剂(包括A液:质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和B液:质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液)、体积分数为50%的酒精溶液,碘液、蒸馏水。
(制作临时装片的步骤:滴清水→放材料→盖片。注意盖盖玻片时如何防止气泡产生:将盖玻片的 先接触装片中央的水滴,再将盖玻片慢慢放下)
五、方法步骤:
(一)可溶性糖的鉴定
操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 1. 制备组织样液。
(去皮、切块、研磨、过滤) 苹果或梨组织液必须临时制备。 因苹果多酚氧化酶含量高,组织液很易被氧化成褐色,将产生的颜色掩盖。 2. 取1支试管,向试管内注入2mL组织样液。 3. 向试管内注入1mL新制的斐林试剂,振荡。 应将组成斐林试剂的甲液、乙液
配制、储存, 前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂;
切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。 斐林试剂很不稳定,甲、乙液混合保存时,生成的Cu ( OH ) 2在70~900C下分解成黑色CuO和水;
甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应,无Cu ( OH ) 2生成。 4. 试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中,加热约2分钟,溶液颜色:浅蓝色 → 棕色 → 色(沉淀) 最好用试管夹夹住试管上部,使试管底部不触及烧杯底部,试管口不朝向实验者。
也可用酒精灯水浴加热。 防止试管内的溶液冲出试管,造成烫伤;
缩短实验时间。 (二)脂肪的鉴定
操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片,将薄片放在载玻片的水滴中,用吸水纸吸去装片中的水。 干种子要浸泡3~4小时,新花生的浸泡时间则可缩短。 因为浸泡时间短,不易切片,浸泡时间过长,组织较软,切下的薄片不易成形。切片要尽可能薄些,便于观察。 在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液,染色1分钟。 染色时间不宜过长。 用吸水纸吸去薄片周围染液,用50%酒精洗去浮色,再用吸水纸吸去酒精。 酒精用于洗去 色,若不洗去,会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时,酒精是脂溶性溶剂,可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。 用吸水纸吸去薄片周围酒精,滴上1~2滴
,盖上盖玻片。 滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。 低倍镜下找到花生子叶薄片最薄处,可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。 装片不宜久放。 时间一长,油滴会溶解在乙醇中。 三、蛋白质的鉴定
操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 制备组织样液。
(浸泡、去皮研磨、过滤。) 黄豆浸泡1至2天,容易研磨成浆,也可购新鲜豆浆以节约实验时间。 鉴定。加样液约2ml于试管中,加入双缩脲试剂A,摇匀;再加入双缩脲试剂B液3~4滴,摇匀,溶液变紫色。 A液和B液也要分开配制,储存。鉴定时
。
CuSO4溶液不能多加。 先加NaOH溶液,为Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。A、B液混装或同时加入,会导致Cu2+变成Cu ( OH ) 2沉淀,而失效。
否则CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜色。 可用蛋清代替豆浆。 蛋清要先稀释。 如果稀释不够,在实验中蛋清粘在试管壁,与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上,使反应不容易彻底,并且试管也不易洗干净。 附:淀粉的检测和观察:用试管取2ml待测组织样液,向试管内加2滴碘液,观察颜色变化。 碘液不要滴太多 以免影响颜色观察 实验三 用显微镜观察多种多样的细胞(必修1一P7)
一.实验目
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