包涵体的溶解原理及方法.docVIP

蛋白包涵体-溶解原理及方法2009年03月15日 星期日 00:20维持包涵体内蛋白质结构的作用力是分子内的作用力，这种作用力也维持天然蛋白质的稳定性的结构。先前有报道这种作用力是共价键结合的，但是，现在趋向于一致，就是维持包涵体内部的蛋白质的紧密的结构的是非共价键的作用力。二硫键，无论是正确的还是错误的二硫键，在维持内部蛋白质的紧密的结构中都没有发挥直接的作用。最经常的获得活性蛋白质的第一步是溶解这些包涵体蛋白质，溶解液是使这些包涵体蛋白质完全变性的成分，当蛋白质被溶解以后，则进入到蛋白质的体外折叠的过程。 1. 遵循标准 包涵体蛋白质的溶解同样是一个工艺的关键的步骤。溶剂的选择会影响后续的操作、最终的各种蛋白质的收率以及最终的成本，必须遵循以下的标准： (1) 快速溶解的动力学； (2) 与蛋白质的结合是可逆的； (3) 对细胞碎片的分离方法没有干扰作用； (4) 对温度没有依赖作用； (5) 抑制蛋白质酶的降解作用； (6) 与蛋白质的氨基没有化学修饰作用； (7) 在可能的情况下，选择最低的溶解浓度和廉价的溶剂，并适于以后的复性方法。 2. 溶解包涵体的试剂 最经常使用溶解包涵体的试剂包括离液剂或者去垢剂。 最经常使用的溶解和制备蛋白质的离子型的离液剂最早于1969年Hatefi等人发展的离子型的去垢剂如SDS是另外一种溶解