白芍总苷改善老年性痴呆机制及研究.pdfVIP

中文摘要 白芍总苷改善老年性痴呆的机制研究 摘 要 of 目的：白芍总苷(Totalglucosides 有效部位，主要含有芍药苷、芍药内酯苷、羟基芍药苷、芍药花苷、苯甲 酰芍药苷等单萜类化合物。现代药理研究表明，白芍总苷具有抗炎，免疫 调节，保肝，抗氧化，并对中枢神经系统有一定的保护作用。有学者研究 发现芍药苷对东莨菪碱致小鼠记忆形成障碍、亚硝酸钠致记忆巩固障碍和 乙醇致记忆再现障碍有明显的改善作用。本课题组前期研究亦发现TGP 对拟血管性痴呆大鼠的行为学有一定的改善作用。为探索TGP改善老年 性痴呆的作用机制，扩大TGP的临床应用及研制治疗老年性痴呆新药， 本研究采用体外培养人神经母细胞瘤细胞SK-N．SH细胞，以连二亚硫酸 钠复制SK．N．SH细胞缺氧损伤模型，从细胞及分子水平，初步探讨TGP 防治老年性痴呆的作用机制。 方法： 采用连二亚硫酸钠建立SK．N．SH细胞缺氧损伤模型，实验分为正常 50，100， 200，400，800 观察不同浓度的TGP对SK。N．SH细胞缺氧损伤的保护作用。 l形态学观察 倒置相差显微镜下观察各组SK-N．SH细胞生长及形态的变化。 2MTT法检测细胞存活率 MTT法测定各孔的存活率，以OD值表示。 3乳酸脱氢酶(LDH)活性及LDH释放抑制率 上述损伤发生后16h，收集细胞培养上清液，按试剂盒说明书测定 LDH的活性。 LDH)×100％ 4超氧化物歧化酶(soo)活性检测 采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性，分别取细胞培养上清液，按试 中文摘要 剂盒说明书顺序加入相应试剂，比色法检测细胞培养液中SOD的吸光值 并计算其活性，其单位以U／mL表示。 5丙二醛(MDA)含量检测 采用硫代巴比妥酸法测定MDA含量，分别取细胞培养上清液，按试 剂盒说明书顺序加入相应试剂，比色法检测细胞培养液中MDA的吸光值 并计算其含量，其单位以nmol／mL表示。 6TUNEL法检测SK．N．SH细胞细胞凋亡 取对数生长期细胞接种于放有盖玻片的6孔板中，做细胞爬片。缺氧 SK-N．SH细胞细胞凋亡。 。． 7Western blot法检测SK．N．SH细胞Caspase．3蛋白表达水平 定Caspase．3蛋白表达。 结果：’ l细胞形态学观察 正常对照组SK．N．SH细胞呈圆形，较少有突起，为贴壁细胞，折光 性较强；模型组多数细胞肿胀，折光度减弱j最终细胞成团、漂浮，并有 许多细胞崩解物，TGP各浓度组均较模型组细胞数量较多，折光性明显 增强，细胞裂解碎片减少，多数细胞重新贴壁伸展。 2TGP最佳作用浓度与最佳作用时间的确定 与正常对照组相比，模型组OD值显著降低(PO．01)；与模型组相 比，TGP8、40 200、1000 mg／L 度在40-1000 mg／L之间，最终确定TGP预孵育浓度为如下梯度：50、 100、200、400、800 mmol／L)于不同浓度 mg／L，Na2S204(终浓度为5 TGP干预1h后加入，最佳预孵育时间为16h。 3MTT法检测细胞存活率 与正常对照组相比，模型组OD值显著降低(PO．01)；与模型组相 比，TGP50 100、 mg／LOD值有增高趋势，但无统计学差异(PO．05)，TGP 200、400、800 OD值均显著高于模型组(PO．01)，且最佳作用浓 mg／L 度为400mg／L。