大鼠脑创伤后ERK1%2f2信号通路介导神经细胞凋亡分子机制及研究.pdf

中文摘要 大鼠脑创伤后ERKl／2信号通路介导神经细胞 凋亡的分子机制研究 摘 要 目的：探讨TBI后ERKl／2参与细胞凋亡通路的机 AIF等指标表达变化，从线粒体．细胞凋亡通路上探讨 TBI后ERKl／2活化诱导神经细胞凋亡的分子机制，为临 床上的早期干预和控制开拓新思路。 鼠头部，造成大鼠中度弥漫性颅脑创伤。 随机分成4组：假手术组(实验对照组，n=42只)；创伤 48h、72h、7d等7个时相点。 检测指标及方法：①神经运动功能损害评分；@HE 染色观察一般组织结构；⑧免疫组织化学方法检钡JJP53、 (TUNEL)法检测细胞凋亡动态变化。 另取40只大鼠随机分为脑创伤组、U0126组、假手 中文摘要 检测大鼠伤后学习记忆功能。 定量测定：免疫组化阳性细胞阳性度强弱用Image 6．0数码医学图像分析系统定量分析测定，以平均 Proplus blot蛋白定量分 光密度(IOD／Area值)来表示；Western 析用Gel—Doc凝胶成像分析系统定量分析测定，以目标平 均灰度值与内参平均灰度值的比值来表示。 统计学分析：实验中所得数据均用x+s表示，用SPSS 关分析，以单9n,!Je刘．05，表示差异有统计学意义。 结果：l 形态学观察结果大鼠致伤后多数呈短暂 去大脑状态及呼吸抑制。HE染色光镜结果：假手术组脑 组织结构正常，蛛网膜下腔、脑室无出血， 血管管腔正 常，管壁光滑，神经细胞数量多，形态完整；创伤组蛛 网膜下腔可见出血或黄染，大脑皮层组织广泛水肿，血 管腔扩大、充血，伤后3h和72h神经细胞变性、肿胀、 坏死显著。上述观察结果与Marmarou所描述的弥漫性 脑创伤的病理形态特征相符。给予U0126干预组病理形 态改变较创伤组有不同程度减轻(Fig．11．1，2)。 2神经功能评分结果 假手术组大鼠神经运动功能评 分为24分；创伤组大鼠神经功能评分在7．9分之间；U0126 干预组神经功能评分15—18分之间。与假手术组比较，在 创伤组和U0126干预组中，大鼠在后肢抓持反射、触须 诱发前肢定位及侧向垫步试验中均表现异常，评分下降， 差异有统计学意义(尸D．嬲)；创伤组与DMSO组比较， 中文摘要 无显著差异(尸0．05)；U0126干预组与创伤组比较， 神经功能评分提高(PD．05)(Tablel．1，Fig．9)。 3NO测定结果假手术组：可检测到少量No，No量 不随时间发生显著变化；脑创伤组30min即可见N0含 量迅速升高，于24h达高峰，持续高表达至72h，但仍 较假手术组为高，经图像分析，脑创伤组与假手术组相 126 创伤组与DMSO组比较，无显著差异(尸0．05)；U0 组与脑创伤组比较，各时相点NO量均有不同程度减 (PO．05)(Table6；Fig．6-1，2)。 4 Cyte免疫组化检测结果Cytc产物为棕黄色颗粒， 定位于神经细胞胞质。假手术组偶见阳性细胞，着色浅 淡，免疫反应性不随时间发生变化。创伤组与假手术组 比较，伤后3h Ctyc阳性细胞显著增多，着色加深，免疫 反应性增强(尸D．05)，随时间推移阳性细胞逐渐增多， Ctyc免疫阳性反应性时程与创伤组相似，但免疫反应性 3；Fig．3—1，2)。 5 P53免疫组化检测结果P53阳性产物为棕黄色颗 粒，定位于神经细胞胞质或胞核与假手术组比较，脑创 中文摘要 后7d不能检测得到p53蛋白的免疫反应，镜下观察可见 (尸D．05)(Table1-2；Fig．1—1，2)。 6 AIF免疫组化检测结果AIF阳性细胞核呈棕黄色， 假手术组大鼠脑组织中仅见少量AIF阳性细胞，与假手 术组比，创伤组3hAIF阳性细胞明显增加，24h达高峰， (Table 4；Fig．4—1，2)。 7