利用微卫星标记分析球花石斛遗传多样性鉴定其药材地理来源.pdf

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中文摘要 中文摘要 (DP拧加6f甜册Sw.)药用植物,球花石斛的茎段可以加工成一种重要的传统中药 “黄草石斛,此中药具有很好的疗效,具有提高免疫力、益胃生津、滋阴清热、 润肺止咳等功能。此外,球花石斛由于花姿优美,还可以用作装饰品。然而,由 于其在药学及园艺业上的广泛应用,导致了球花石斛野生资源的急剧减少。 研究一个物种的遗传多样性及遗传结构是保护该物种的前提,因为它们反映 了该物种的生存及资源现状。目前,由于仍不了解球花石斛居群的遗传多样性, 这给球花石斛野生资源的保护带来极大的困难。本文采用微卫星(S螂1e Sequence R印eat,SSR)分子标记技术对其野生居群遗传多样性及遗传结构进行 了研究,探讨野生球花石斛日益减少的内在原因,从而为其野生资源的保护、药 材的道地性和合理开发利用提供科学依据。鉴别出中国药材市场上球花石斛的地 理来源对于保护其野生资源及确保“黄草石斛”的质量至关重要。本文采用微卫 星标记结合贝叶斯统计学方法来鉴别12个球花石斛的商品形式(“黄草石斛)的 地理来源。 本研究通过磁珠富集法开发球花石斛微卫星。在含有微卫星的序列中选取了 24条设计引物。以采自中国南部地区的5个不同表型的球花石斛基因组DNA为材 Chain 料,在同样的聚合酶链式反应(P01ynler邪eRe枷on,PCR)条件下对这些 引物进行扩增,以检测引物扩增产物多态性。这24对引物中,14对引物可用于球 花石斛的遗传特点分析。 采用本研究所开发的14个多态性微卫星位点,对来自中国、缅甸、老挝、泰 国及印度的5个居群共136个球花石斛个体进行遗传多样性及遗传结构分析。在物 种水平上,14对微卫星引物共检测到136个等位基因,平均观察等位基因数(Na) 均期望杂合度(He)为0.85。在群体水平上,各群体内的有效等位基因数范围为 4.45“.83,期望杂合度(He)值变动范围为0.7㈨.85,表明球花石斛野生群体 中存在较高的遗传多样性。基因分化系数(FSt)的范围是O.06.O.22,平均值为0.12, 即群体间存在12%的遗传变异,说明尽管绝大部分遗传变异存在群体内,群体间 遗传分化水平仍相对较高。 在球花石斛5个居群14对微卫星引物数据基础上,分别采用基于贝叶斯概率 论的两种相关软件饼NECLASS2.O及SnmCn瓜E2.2,对中国药材市场上由球 花石斛加工而成的12个“黄草石斛样品的地理来源进行鉴别,结果显示:4个 样品来自缅甸居群,4个样品来自老挝居群,2个样品来自中国居群,1个来泰国 中文摘要 居群,1个样品来自印度居群。研究结果表明缅甸和老挝是中国药材市场上球花 石斛主要来源地。同时也说明缅甸及老挝两国的球花石斛野生资源很可能遭受到 过度采挖,因此这两个国家迫切需要采取有效措施保护该药用植物。 关键词:球花石斛;SSR;遗传多样性;遗传结构 Ⅱ AbStraCt Rchb.fisa戗Ldi!tionalCMneseherbof DP刀加6f搠啦哪枷,甜m DP,2西.D6f姗z, 喇dace鹋.Thestemsof c趾be D.啦邮枷,.姗z processedi11t0‘‘}王uangcaoSllib屿’’ cl嬲sofTraditionallCh血eseMedici】舱晰mC吼tiVeeffect.nh丛 an证印rtallt good beenusedasatomcmedicinet0erlhancethe Yinandclear imml】ne如nction,nou】叵sh stomach弛d

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