亲和色谱法从兔胸腺中纯化Jo-1抗原.pdf

中文摘要 亲和鱼谱法从兔胸腺中缝亿Jo一 抗原 蕊 要 水平不容乐观[1】。提高抗．ENAs的检测水平要作多方面的努 力，大璧地制备密嚣量优越性毹稳定的孬丁提取性核抗原 出大量高纯度单一特异性的抗原，解决抗原供应问题。因内 条件的限制，只是应用国外原料进行简单制备，仅能用于免 虽有所掇离，毽特吴痰却大大降氮。 本实验试濯建立一静 敏感度和特异度都较高的方法，用于临床检NIJJo—i抗体，提 平的提赢。 蟊的：建立稳定可靠、简便、廉价的亲帮色谱法，觚兔 胸腺中纯化出能用予斑点印迹法 DB 检NJo—l抗体的抗原， 体的检测水平。 中文摘要 材料：兔脾黥保存在堰O℃冰麓中，2份蕈一特晏性Jo一1 倒，DM ll壤、系统性红斑狻疮14镤、类风漫关节炎13铡、 原发性干燥综合征8例、成人斯蒂尔病1例、莱特尔综合征l 铡、抗磷脂综合征1铡、正常人23镶，均来囱于j乏京协秘医 院风湿免疫科皿清库。 方法：冻存的兔麴腺解冻复苏后匀浆，鬻PBS提取葜中 总骚白质，先高速离心1小时，弃沉淀，留上清；上清经超 高速离心ld,爵后，弃沉淀。掰一20℃预冷丙酮沉淀上清中的 总獗白质，低温晾干，制成兔胸腺丙酮粉。用适量的PBS提 疫亲和色谱法纯化单一特异性Jo．t抗血清中的总lgG，经 4B 上制备免疫亲和色谱接，用亲秘色谱柱纯化ENA囊_I]抗原中的 晟澎免疫瘸盘漶秘正常惑清中lo—l抗髂酶疆瞧率，探讨检测 结果对诊断PM／DM的敏感度和特异度。 结果：100 g兔鼹艨露制嚣5—7g嚣酮粉，褥酮羚中的蛋自 质含量为19．24％。经亲和免疫色谱纯化的保留组分可富集 活性起好，仅59lJo．1抗体阳性皿清反应，不和风湿免疫病常 中文摘要 戆有保护 乍建。翔纯纯妁lo—l挠原铡备DB试裁盒，初步结果 提示阳性结果对诊断PM的敏感度为30％，特异度为100％。 结论：兔勰腺中有弱一l抗原，亲察色谱法是…释卡美速篱 便的纯化Jo．1抗原的方法，亲和色谱纯化的Jo一1抗原能满足 DB法裣溯如一l撬体的黉求，亲和色谱法有藏成为获取高纯度 发和特异度均较磊前l瞄床所鞠检灞方法高。 关键词：兔胸腺；亲和色潜；Jo．1抗原；Jo．1抗体；多发 性肌炎／皮肌炎；斑点印迹法；免疫印迹 英文摘要 PurificationofJ0—1 FromRabbit Antigen ThymusBy Affinity ABSTRACT isahallmarkof troduction：Jo一1 antibody tO PM／DM． significantdiagnosis PM ／dennatomyositis DM and onetheantibodiesextractablenuclear Anti．-Jo—-1is of against theroutirle ofanti—ENAswasnot assay ant遮ens ENAs ，but insomeChinese Anumberof enough hospitalstodayIlJl good havetobeconsideredfor the points improving of ENAs isthe of amount all，enoHgh high preparation quality theother basistomakeanti．ENAsdetectionreliable．On hand， detection are inanti--ENAs theremanyadvantages byenzyme·· orderto anti—ENAsdete—ction develop immunoassay EIA ．In EIAinclinical first istoobtain with laboratory,theobject ENA and 1989，Chen qualifiedpure reliablyconveniently．In Peizhenere Jo—l 121,buttheyonly preparedantigen rawmaterial anddetected Jo—l from crude antigen imported jo—l double and antibodyby to Jo—I are detect widelyapplied immunoblotting IB assay in the ofDIDislow．The China，butsensitivity antibody lBissomewhat its of hi，gher,butspecificity sensitivity w