双酚A对离体海马神经元突触形态可塑性影响.pdf

llIllllllllMlllllllrollIII lIIl Y2419949 BISPHENOLAONSYNAPTIC INVITROEFFECTSOF MORPHOLoGICALPLASTICITYOF NEURONS ADissertationin Ecology Underthe ofProfessor Supervision Xu Xiaohong By Normal Zhejiang University Jinhua，Zhejiang，China May,2013 双酚A对离体海马神经元突触形态可塑性的影响 摘要 A，BPA)，是一种广泛用于塑料生产的环境内分泌干扰 双酚A(bisphenol 物。BPA可以模拟天然激素作用，干扰内分泌系统正常功能。由于含有BPA的 生活用品的普遍使用，BPA在人类的高暴露率引起人们的高度关注。近二十年来 越来越多的研究表明，低剂量的BPA可以干扰雌激素和雄激素活性，对脑发育 产生不利影响，导致许多生理和心理上的异常。本实验室前期研究发现，围生期 BPA暴露影响子代小鼠的多种社会行为及其性别分化；青春期至成年早期BPA 暴露负性调节海马突触界面结构修饰、下调突触蛋白PSD．95表达，并减退学习 记忆功能；但在体急性暴露却促进大鼠的被动回避短时记忆，进一步体外研究发 现，BPA急性暴露可增加离体培养海马神经元的树突丝密度及树突分支总长并促 进树突丝运动性。因此推测BPA急慢性暴露对神经元结构和功能的影响可能不 同。 突触可塑性是指突触在一定条件下改变形态、增减数目和调整功能的能力， 包括突触传递效能和突触形态结构的变化，其形态结构改变主要表现在树突棘 上，而树突棘的发育又和肌动蛋白细胞骨架的重构密切相关，肌动蛋白的聚合和 ／或解聚的动态变化是树突棘生长、运动和形态改变的基础，随着对突触研究的 进一步深入，越来越多的研究表明肌动蛋白细胞骨架在突触形态可塑性中发挥重 要作用。PSD．95(postsynapticdensityprotein95)是突触后致密体(PSD)上具有代表 I位 性的脚手架蛋白，可对信号转导分子进行整合从而调节突触活动；Synapsin 于突触前膜，通过磷酸化(p-synapsinI)和非磷酸化作用参与调控Ca2+／钙调素依赖 性神经递质的释放，从而参与神经元之间的信息的传递，它既是突触发生的标志， 又能反应突触的传递效能。 鉴于此，本实验研究慢性BPA暴露对海马神经元突触形态可塑性的影响， 同时应用雌激素受体拮抗剂、受体拮抗剂和MEKl／2抑制剂探索慢性BPA暴露 影响突触形态可塑性的可能机制。 方法：取出生24h内的SD大鼠做原代海马神经元培养，体外培养第四天 (4 DIV)JJ口／k药物，实验设立对照组(DMSO)、BPA各剂量组(10、100nM)，暴露 时间为6d。在10 DIV时，采用免疫荧光染色法，用纤维型肌动蛋白(F．actin)特 异性结合蛋白鬼笔环肽(罗丹明标记)染色离体培养海马神经元，显示神经元细胞 骨架，激