实验性癫痫发作后海马结构GABAB受体亚单位表达变化的激动剂影响.pdf

实验性癫瘸发作后海马结构GABA日受体亚单位表达变化及其搬动剂影响的研究 中文摘要 实验性癫痫发作后海马结构GABAB受体亚单位 表达变化及其激动剂影响的研究 中文摘要 颞叶癫痫①P)是最常见的局灶性EP，治疗较为棘手，约占难治性部分性EP的 70％，严重影响了患者正常的工作、生活和学习，成为中枢神经系统(CNS)疾病的一 大顽疾，因此研究颞叶EP发病机理，寻找有效的治疗方法，不但有重要的理论价值， 也是f疆床期望所在．颞叶内侧的海马结构在颞叶EP的发生发展过程中具有重要意义， 因此常被选择为EP研究的靶区．EP发作是由于兴奋性增加、抑制性减弱导致的大脑 短暂超同步化放电．神经元的兴奋及抑制可以通过不同的神经递质来介导，Y·氨基 丁酸(GABA)是CNS最主要的抑制性神经递质，通过其抑制作用，维持着神经元 兴奋与抑制的平衡，当该平稳被打断，则EP发作随之发生．随着分子生物学实验技 术的迅速发展，人们越来越多地致力于GABA受体与EP相互关系的研究，尤其是基 三种亚型受体，其中B亚型受体(GABAB．R)系唯一代谢性受体，其介导慢速的、 持续较长的抑制效应，且作用持久，对抑制脑电活动的扩散起重要作用，因此，倍受 EP研究者的关注．由此，我们对海人酸(KA)诱导大鼠颞叶EP发作后海马结构2 亚单位作用和可能的适应性变化，为进一步明确颞叶EP发病的受体分子生物学机制 奠定基础． 一、脑内局部给药建立海人酸颞叶癫痫模型的研究 目的探讨脑内局部给药建立颞叶EP模型方法，为以后的颞叶EP研究奠定基 础。方法通过立体定向技术向大鼠海马局部注射海人酸4}Il／l(g，观察注射后大鼠 的行为学、脑电图和病理学改变．结果KA注入海马后大鼠表现为凝视、湿狗样 抖动、咀嚼运动、点头、肢体阵挛等：随后出现阵发性旋转、向上窜跳、四肢抽搐， 反复间歇发作约10h后发作停止．以后每周约自发性发作1~3次，主要为Il级～Ⅳ级； 同时，EP发作后大鼠防卫反应级别高，存在明显的易激惹表现。EEG记录到大脑皮 质丛集放电，棘波或尖波持续发放．病理形态学上观察到KA注射侧海马结构普遍受 I 茎璧丝塞塑垄堡曼查呈竺塑璺垒!垒茎竺垩璺竺查竺壅些墨基茎垫型墅堕些!塞 !苎塑里 损，以CA3区最严重，齿状回(DG)最轻。KA注射对侧神经元受损明显轻于KA 注射侧，存在明显单侧病灶的病理改变．结论大鼠脑内局部注射KA可成功建立 颞叶EP模型，其行为症状、电生理及海马病理学改变类似人类颞叶EP，且化学点燃 成功率高，重复性好，局部给药较系统给药具有许多优点，是研究颢叶EP发病机制 及筛选抗瘸药的理想模型． 二、GABAB受体亚单位在颞叶癫痫大鼠海马结构的表达变化 变化，以迸一步了解颞叶EP发病的受体分子生物学机制．同时，探讨GABAB-R激 为筛选作用于该类亚单位水平的新型抗痫药提供依据．方法在脑内局部注射KA 建立颞叶EP模型的基础上，应用原位杂交技术，在基因水平上，检测海马结构各亚 区、不同时程的2种亚单位mR．NA表达及其单个残存细胞mRNA表达的变化；应用 免疫组化分析方法，在蛋白水平上，检测海马结构各亚区及颞叶皮层不同时程的2 种亚单位表达的变化：同时，应用原位杂交技术，检测GABAB-R激动剂BLF干预后 2种亚单位基因表达的变化． 结果(1)KA注射侧海马结构残存细胞明显减少，以 CA3区细胞缺失最多，致痈7d时缺失量已大予85％，且胶质细胞增多；其次以CAl 区神经元缺失明显，致痫7d后缺失量在50％以上；DG区细胞缺失量最少，此外， KA注射侧残存细胞数明显少于KA注射对侧，显示了KA注射侧明显的单侧病灶． 随着时间的推移，致瘸组病理改变逐渐加重，注射侧残存正常细胞进一步减少．(2) 表达持续低下，但有逐渐表达增加的趋势；DG区表达暂时性下降后很快回升；单个 残存正常细胞数的亚单位mRNA表达则明显增加，尤其CA3区2种亚单位表达水平 上调明显。(3)KA致痫早期海马结构2种亚单位免疫反应未见明显改变，随后CAI 和CA3区逐渐表达下降而处于表达低水平，与神经元变性一致．DG区和颞叶皮层的 2种亚单位表达很快恢复且增加明显．此外，2种亚单位蛋白表达变化基本一致，但 间点延迟，且表达下降幅度小于非干预的致瘸组；在CAI与CA3区2种亚单位表达 下降最明显时，干预组表达水平明显高于非干预