水牛FSHR基因及其表达检测.pdf

水牛FSHR基因与其表达检测的研究 摘要 本论文研究内容是水牛FSHR基因和表达检测体系的建立。论文共分 为两部分：第一部分为文献综述部分；第二部分，包括第一章和第二章， 为试验研究部分。 第一章研究目的是通过对水牛FSHR基因的克隆、序列分析，为进一 步研究FSHR基因的作用机理和设计特异于水牛FSHR基因的半定量检测 引物打下基础。根据荷斯坦牛FSHR基因设计引物，分别以水牛血液DNA ， 和卵巢组织总RNA为模板，通过聚合酶链式反应(PCR)、反向聚合酶链 和cDNA片段。该扩增片段经纯化后，连接到pMDl8．T载体上扩增测序。 测序后分析表明，该基因5’启动子区(Promoter)长度为967 bp，cDNA全 bp为3’侧翼 序列(UTR)，65—2152 bp为 显子区域做多重比对分析后，构建部分哺乳动物系统进化树，与实际进化 Server 关系保持很好的一致。使用TMHMMv．2．0对包括编码FSHR678个 氨基酸和N’端17个氨基酸信号肽的全部序列(起始密码子为通用密码子 ATG，终止密码子为，I从)进行分析，该受体胞外域、跨膜域和胞内域三 I 部分的大小分别为349、264和65个氨基酸。 第二章是根据第一章中水牛FSHR基因前半段序列设计特异于水牛的 鉴定引物，根据猪、水牛基因设计内参引物g-action，采用半定量检测法比 较和分析在不同组织、不同卵泡类型、不同质量的COCs颗粒细胞上卵泡 刺激素受体mRNA(FSHRmRNA)的表达差异，以及COCs培养过程中卵 泡FSHR 表达，而其他检测的组织中没有表达；2)不同直径大小卯泡之间的COCs 颗粒细胞上FSHRmRNA相对表达量有差异，大卵泡的COCs与中、小卵 泡COCs之间差异显著，中、小卯泡COCs之间无显著差异，小卯泡的表达 强于大卵泡；3)A、B、C三类COCs颗粒细胞上FSHRmRNA相对表达量 达量呈递减趋势。 关键词水牛促多Jj泡素受体反转录PCR克隆半定量，PCR 颗粒细胞 Ⅱ GENEANDITSEXPRESSl0N STUDYONBU同EAI，oFSHR ABSTRA(：r and ThisthesisstudiesissuesrelatedtobuffaloFSHR its is arranged gene expression，it n I intwo I isareviewof includes and II． parts：part literatures；partchapterchapter whichdealswiththe works． experimental The ofthis in 1wastounde巧mndthemechanismoffuactionof objective studychapter for