抗人脑胶质瘤单克隆抗体SU-2000的建立及识别抗原的提取.pdf

中文摘要 抗人脑胶质瘤单克隆抗体SU一2000的建立及其识别抗原的提取 抗人脑胶质瘤单克隆抗体 SU．2000的建立及其识别抗原的提取 (摘要) 存在，鼠源性单抗对人体而言是异种蛋白，分子量大，临床应用中受到 一定的限制。为此小分子人沥七的抗胶质瘤单抗随着分子生物学的深入 发展应运而生，但在临床上得0应用的极为少见，原因在于其特异性差、 活性低。鼠源性杂交瘤单抗则．司其效价高，特异性好的优势，临床应用 的势头未减，建立杂交瘤细胞株仍然是获取单抗的主要手段。本实验在 当年建立SZ38、SZ39方法的基础上，进行适当改进，旨在建立一株新型、 具有高效、高特异性、高产的杂交瘤细胞株。 、 1 1．SU．2000杂交瘤细胞株的建立／ √ ， 目的：制备新的分泌抗人脑胶质瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞株。防法： ＼ 骨髓瘤细胞融合，通过卜L盯选择性培养，使目的细胞增殖并形成克隆； ②分别利用SHG一44细胞、正常脑组织的总蛋白作为阳性、阴性抗原包板， 行ELISA检测，筛选出阳性孔；③对阳性孔进行单克隆化，证实杂交瘤 细胞100％分泌单抗后，予冻存、保种；④小鼠腹腔注射杂交瘤细胞，获 取含单抗的腹水；⑤半年后按常规方法复苏杂交瘤细胞。结果：①HAT选 择性培养后，有26孔出现杂交瘤生长；②ELISA检测，筛选出一个阳性 孔；③经过多次单克隆，杂交瘤细胞100％分泌单抗；④小鼠腹腔注射杂 交瘤细胞后，获得含大量单抗的腹水；⑤半年后，复苏杂交瘤细胞5次， 、 均获成功一结论：初步建立起一株分泌抗人脑胶质瘤单克隆抗体的杂交 中文摘要 抗人脑胶质瘤单克隆抗体SU一2000的建立及其识别抗原的提取 瘤细胞株，命名为SU一2000(苏大．2000年)。 2．SU．2000单抗的鉴定 目的：对SU．2000单抗的重要特征进行鉴定，为进一步的应用提供依据。 ／ 型抗体，采用双向免疫扩散法进行亚类分析；②效价测定：SHG．44胶质 瘤细胞作为抗原包板，分别将腹水及纯化单抗进行倍比稀释，通过ELISA 检测鉴定腹水效价及抗原抗体的结合力；③组织特异性分析：肿瘤及正 常人体组织标本制成石蜡切片，细胞制成悬液涂在玻片上，冷丙酮固定， 纯化的SU．2000单抗作为一抗进行免疫组化染色。④单抗识别抗原的定 1 一抗，分别行免疫荧光和免疫组化染色。结果：①SU一2000单抗和抗IgG 反应：③SU一2000单抗和8例星形胶质瘤均起阳性反应；和4例脑膜瘤、 2例脑转移癌呈阴性反应；与颅外肿瘤的反应中，除黑色素瘤外，均呈阴 性反应；和16种人体正常组织无一出现阳性反应：④免疫荧光及免疫组 、 化染色表明，SHG．44胶质瘤细胞上以胞膜染色为主，胞浆可能也有染色。专一 V 价高、特异性好的质量标准。 3．SU．2000识别抗原的提取