蛋白质吸附平衡和动力学理论的研究.pdf

中文摘要 蛋白质的离子交换平衡和动力学行为在生物分离过程的设计和优化中起着 十分重要的作用。然而，离子交换色谱理论尚不完善，围绕蛋白质离子交换色谱 理论，本文展开了以下的研究工作： 1．采用统计热力学模型(ST模型)研究了蛋白质(BSA和Hb)在阴离子 交换剂DEAE M上的吸附平衡行为。结果表明，ST模型可以很好地 Spherodex 描述不同离子强度条件下单组分和双组分蛋白质的吸附平衡行为。随着离子强度 增高，吸附相伴离子对蛋白质与吸附剂之间和蛋白质分子间静电力的屏蔽作用增 大。在相同的离子强度条件下，BSA与DEAE M之间的静电引力较强： Spherodex BSA分子之间的静电斥力大于Hb分子之间的静电斥力。在相同的离子强度条件 下的Hb-BSA双组分吸附体系中，BSA与吸附界面静电吸引作用强，吸附竞争 力强。由sT模型参数1／trj和屯分别计算得到蛋白质的有效电荷数基本一致。 2．采用sT模型进而研究了BSA和Hb在阳离子交换剂SPFF的 Sepharose 吸附平衡行为。研究结果表明，随着离子强度增高，吸附相伴离子对蛋白质与吸 附剂之间和蛋白质分子间静电力的屏蔽作用增大；而溶液pH值的升高引起蛋白 质与吸附界面问的静电引力及蛋白质分子问静电斥力减弱。在相同的离子强度和 pn值条件下，Hb与sPsephflflO∞FF之间的静电引力较强；Hb分子之间的静电 斥力大于BSA分子之间的静电斥力。此时，在Hb．BSA双组分吸附体系中，Hb 与吸附界面静电吸引作用强，吸附竞争力强。 3．建立了考虑吸附剂的粒径分布(PSD)的有效孔扩散模型(EPDM)、表 力学实验，研究了蛋白质(BSA)在阳离子交换剂(SPFF)孔内的扩 Sepharose 散。结果表明，这三种模型均能很好地拟合蛋白质的动态吸附曲线；但由于传质 驱动力不同，各模型对孔内蛋白质沿吸附剂径向浓度分布图的预测存在较大差 异。 4．利用共聚焦激光扫描显微镜(CLsM)直接观测了蛋白质在吸附剂颗粒内 部的径向浓度分布情况。通过观测结果与考虑吸附剂PSD的模型(EPDM。SDM 和MSM)拟合吸附剂孔内蛋白质径向浓度分布结果的比较，可以看出在目前的 研究体系中SDM能够比EPDM更好地预测孔内蛋白质浓度分布图，MSM模型 对孔内蛋白质浓度分布的预测结果介于另外两种模型之间。 5．由于在使用共聚焦显微镜观测吸附剂孔内蛋白质时，需要用荧光色素标 记蛋白分子，给实验结果带来了误差。考虑到使用绿色荧光蛋白作为模型蛋白可 以避免荧光修饰蛋白质带来的不均匀性，因此本研究使用硫酸铵沉淀、体积排阻 18的基 色谱、阴离子交换色谱对含有增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的质粒pUC 因工程重组大肠杆菌进行纯化，分离后得到的目标蛋白为电泳纯，eGFP的荧光 特性不受分离过程的影响。为了更大规模的分离纯化eGFP，进行了膨胀床吸附 技术分离eGFP的初步研究。 关键词：蛋白质离子交换平衡，统计热力学模型，扩散模型，共聚焦激光扫描 显微镜，绿色荧光蛋白，膨胀床吸附 ABSTRACT transferof in and maSs Ion—exchangeequilibriaintraparticle protein are for and of of the great design chrommographyimpo