《Agilent 1200方法和序列设置中的小技巧》.doc

Agilent 1200方法和序列设置中的小技巧做液相色谱断断续续有8年的历史了，自从买了Agilent 1100，感觉做实验方便得多。无需手动进样，摸好条件后只要设好方法和序列，一点击start，仪器就开始工作了。不只是做样品，还可以包括最后的冲柱子，它都能一次性完成。但是方法或序列设置不当的话，会导致做无用功，全部白做都有可能。下面我来谈谈自己的工作经验和技巧。1.??????? 摸条件 (以C18柱为例)可以选单针进样模式，将sample info设置好文件名，比如我做肌苷氯化钠注射液的有关物质，可以在前缀上设jglhn，后面自动生成000，第一针一定要走足够长的时间，我是做化学药的，通常走到主峰保留时间的2倍，看看后面是否有杂质峰出现，要保证针与针之间的数据平行必须做到一针出峰干净后再走第二针。在method里设置必要的参数，比如进样量（20μl）、流动相配比（D泵 0.5%的冰醋酸水溶液）、流速（1.0ml/min）、柱温（35）、检测波长（248nm）、保留时间（45min）等，将摸索好的方法用save as method保存到jg1.m。需要说明一点，走单针时文件名自动累加，第一针是000，第二针就自动生成001。2.?设置序列参数选择序列进样模式，在sequence parameters中设置好第一针的文件名，还是以肌苷氯化钠注射液为例，在前缀上设jglhn，后面自动生成000，把它改为100与单针区别开，免得覆盖！在sequence table中有几个参数是必须设置的，如方法名和进样次数。而瓶号和样品名称是可以不设置的，也就是说可以让仪器只运行方法而不进样，主要用来冲洗或平衡柱子。一个序列中可以包括多种方法，比如做有关物质自身对照法时，低浓度的样品保留时间可以设得短些，假如21分钟出主峰，我就设到24分钟，方法另存为jg2.m。假如我做两个批号的样品，进样和冲洗的设置如下：瓶号 样品名 方法 进样次数1 ref1 jg2 32 sample1 jg1 33 ref2 jg2 34 sample2 jg1 3wash1 1wash2 1我们可以看到序列中一共包含14个文件，它们的文件名是jglhn100——113。最后两个文件是不需要出报告的，wash1和wash2代表冲洗柱子程序，比如wash1用A泵（水）冲洗，wash2用A泵（水）-B泵（甲醇）（30：70）冲洗。这样一来，人可以离开，仪器会自动完成全过程。需要注意的是：确保充足的流动相！此外，在sequence information中设置关机程序，选择shut off，standby状态即可。需要说明的是，如果中途停止，按stop，再按 start时文件名被覆盖。如果你需要保留原来的文件，可以重新设置第一个文件的编号，比如200。3.??????? 巧用partial sequence来补针假如发现有一针结果不理想，需要补进一针或数针，又不想改变原有的序列，就可以用sequence中的partial sequence→run sequence来进行补针。在想要补的文件前面的小方框中打勾，然后运行部分序列即可。4.??????? 实验中出现机械手突然失灵，进样针指示灯变红怎么办？有时侯时间做长了，机械手会失灵，停止工作，指示灯变红。我最近就碰到过这个现象，解决办法：先将样品室的开关关掉，数分钟后重新开启，并且将样品瓶转移到机械手相对容易抓到的位置，重新设置一下瓶位号。比如19、20号就是比较难抓的位置，需要往里转很大的角度，21、22就相对容易些。这些是我从实践中摸索到的一点体会和窍门，也许比较简单一些，希望得到大家的补充。再补充一点：不要忘了设置装流动相的体积，如果中途添加了流动相，一定要即时更新。虽然是个小的细节问题，忽略的话会带来大麻烦的！比如如果实际体积是1000ml,你忘了设置，上回剩余的只有200ml,走一段时间后仪器就自动停止了。而如果情况相反也不行，实际只有200ml,你设了1000ml,会导致空气进入色谱柱，严重时无法恢复。当然这后一种情况很少会遇到，只是提个醒。Agilent1200操作规程一、1200/化学工作站开机顺序(LAN卡联接) 1 打开计算机，进入Bootp；2 打开主机各模块电源（不分先后），等待Bootp接收,显示七行数字后,再双击??????? INSTRUMENT 1 ONLINE 图标,进入 化学工作站；3 调出一个分析方法，检查各参数的设置；4 旋开泵上的排气阀，将工作站中的泵流量设到5ml/min，溶剂A设到100%；5 在工作站中打开泵，排出管线中的气体数分钟；6 依此切换到B、C、D溶剂分别排气；7 将工作站中的泵流量设