马氏珠母贝肉降血压肽分离纯化研究.pdf

马氏珠母贝肉降血压肽分离纯化研究 摘要 马氏珠母贝是培育南珠的主要贝类，贝肉蛋白质经过碱性蛋白酶酶解 可得到体外对血管紧张素转换酶具有抑制作用的降血压肽，本试验经过一 系列的分离纯化过程得到了降血压活性高的多肽，有望对应用生物工程高 新技术开发水产蛋白酶解降血压肽以作为功能食品或药品原料提供技术支 持和理论基础，并为提高我国水产加工水平做出贡献，具有相当重要的意 义。 采用高效液相色谱法检测了马氏珠母贝蛋白原料氨基酸的组成和含 量，结果表明组成马氏珠母贝蛋白的氨基酸品种齐全，贝肉中l8种氨基酸 总含量达至tJ916．08 mg·g～Pro，其中8种必需氨基酸和18种氨基酸的配比、含 量均符合联合国粮农／世界卫生组织所规定的理想蛋白质模式。马氏珠母贝 蛋白中非极性氨基酸和芳香氨基酸含量较高，占18种氨基酸总组成的 37．17％，说明马氏珠母贝肉蛋白质是开发功能食品降血压肽的优质原料。 酶解产物超滤后，10kDa渗透液采用离子交换树脂精制，通过静态吸 附选定717阴离子交换树脂，经过动态吸附考察，得到的最佳离子交换分离 条件为：5 1．741 mL，上 g湿树脂，湿法上柱，1 mg·mLJ贝肉超滤液上样10 样速度、蒸馏水洗、O．5mol·L。NaCl洗脱流速均为1．0 rnL·min1。分离获得的 14．39％。’ mg·mL一，活性回收率为：1 采用凝胶层析进一步分离洗脱峰I矽，得到的适宜分离条件为：蒸馏水 rnm， 为洗脱剂，贝肉肽上样量为11．27 mL，柱规格为20×450 mg·mL，上样1．0 洗脱流速为0．8mL．rain～，分离获得的4个组分中，降血压活性组分主要集中 在G2撑中，其蜗D值为：0．0687mg·mL～，活性回收率为：51．49％。经过高效 液相体积排阻色谱定性分析各组份分子量分布情况表明：各组分中含有的 多肽分子量不同，达到了分离的效果。 将凝胶层析所得的G2撑组分利用半制备色谱分离获得的6个组分中，降 血压活性组分主要集中在H5拌，IC5D为O．0170 mg·mL一。H5群经过第二次高效液 1群，0．00537 相色谱分离之后得到单一组分H5 1群对ACE的抑制 mg·mL一的H5 Da的多肽，经高效毛细管电泳验证其 率为30．95％，H51群是分子量为2674．16 为单一组分。 进行了酶解和离子交换工艺放大试验，结果表明，相同条件下放大5倍 90．25％；离子交换的线性放大后可以发现穿透峰蛋白质回收率基本不变， 而洗脱峰的蛋白质回收率下降了1．3％，在此条件下分离效率依然提高了 40％，由此可见酶解和离子交换的放大实验是稳定的。 关键词：马氏珠母贝肉 降血压肽离子交换凝胶层析反相高效液相 II ASTUDY ONPURIFICATl0N ENZYME FROMPROTEINS INHIBITORYPEPTIDES 0F P烈CTADAⅣ丛RTENSII AB