健康成人诱导痰细胞计数正常值参考范围研究及其意义.pdfVIP

中 文 摘 要 健康成人诱导痰细胞计数正常值 参考范围的研究及意义 摘 要 目的:诱导痰是一种相对无创的气道炎症检测方法，主 要是通过高渗盐水雾化吸入促使咳痰，通过分析咯出痰液的 成份，了解气道的生理或病理状况。它主要用于检测气道是 否存在炎症及炎症的性质，也用于肺部肿瘤的研究，临床上 可用于疾病的鉴别诊断及临床用药指导。诱导痰具有精确、 无创和重复性好的特点，适于连续观察。但其结果的解释有 赖于正常成人诱导痰细胞计数的正常参考值的确定。本文的 主要 目的就是确定正常成人诱导痰细胞总数及分类的正常 参考值及其分布规律，同时探讨吸烟对诱导痰细胞的影响 方法:随机抽取 120例健康成人志愿者，男70例，女 50例，两组年龄均衡，平均年龄 36+13岁 (X 士SD).吸 烟组62例，其中男35例，平均年龄35士12岁，女27例， 平均年龄36+14岁。非吸烟组58人，其中男30例，平均年 龄38士13岁，女28例，平均年龄33+13岁，两组年龄、性 别均衡。所有研究对象符合以下条件:①、无过敏及变态反 应性疾病。②、无支气管哮喘、COPD或其它慢性呼吸系统 病史，无鼻、咽、喉及胸部慢性病史。③,3个月内无呼吸 系统急性感染病史或相应症状。④、FEV1%预期值80%. ⑤、胸部X线检查无异常。非吸烟组要求没有吸烟史或戒烟 20年以上，不包括被动吸烟者。吸烟组为现行吸烟且吸烟指 数 (每日吸烟支数x吸烟年数)100年支。诱导痰前24小时 中文 摘 要 不能吸烟或被动吸烟。 所有符合条件的受试者首先接受肺功能检查，测FEV1% 预期值作为基线数据。吸入沙丁胺醇气雾剂20012g。用射流 式雾化吸入器雾化吸入4.5%高渗盐水。高渗盐水雾化吸入持 续时间依次递增 ((2,4,8,16分钟)。每次雾化吸入完毕后 1分钟测FEV1%预期值，然后清洁口腔、鼻腔，鼓励其尽力 咯痰，痰吐于预先准备好的洁净烧杯中。如果诱导痰过程中 出现下情况中止雾化吸入，中止雾化指征:①、出现呼吸困 难、喘憋或剧烈咳嗽等不适症状，无法继续雾化吸入者。②、 FEV1%预期值较基础值下降大于等于20%者。③、受试者不 能合作或受试者要求中止雾化吸入者。诱导痰中止时基本完 成所有阶段诱导痰程序，或取得满意的痰液标本，则为有效。 否则视为诱导痰失败。如果有上述情况中①或②的情况，立 即中止高渗盐水雾化吸入，并给予沙丁胺醇气雾剂200ug, 必要时静脉滴注氨茶碱或采取其它对症处理。直至受试者安 全恢复。要求诱导痰标本中无脓性、血性、寄生虫或其它污 染成份，否则视为不合格标本，予以剔除。所有诱导痰标本 置于40C冰箱保存待检。 痰液处理:诱导痰标本在2小时内处理，首先从混有唾 液的诱导痰标本中挑出痰块，尽量减少唾液污染。然后称重， 在称重后痰液标本中加入4倍体积0.1%的二硫苏糖醇(DTT) 溶液 (即:1克痰加4毫升DTT溶液)。将加入0.1%二硫苏 糖醇的诱导痰标本溶液置于370C水浴中震荡20分钟，充分 混匀。然后用48itm尼龙滤网过滤。过滤后的细胞混悬液以 2000转/分的速度离心5分钟。在离心沉渣中加入PBS缓冲 液，使细胞混悬液的体积等于离心前体积。台盼兰染色测定 中文 摘 要 细胞活力，并计数细胞总数。剩余的细胞混悬液中加入PBS 缓冲液，调整细胞浓度至约x10“左右。置于细胞离心机中， 以450转/分的转速离心10分钟，取出载玻片，自然风干， 然后装入自动染色机中，进行苏木素一伊红染色。最后封片， 在油镜下进行细胞分类计数，至少计数500非鳞状上皮细胞。 结果:115人成功的完成了诱导痰，成功率95.8%。诱 导痰标本呈粘液状，灰白色，平均重((X1SD)276mg189mga 平均细胞活力为 72%士18%。由于在处理痰液时已选出痰液 块，去除了唾液污染，平均鳞状上皮细胞为4%士7%. 结果显示正常人诱导痰中以巨噬细胞和中性粒细胞为 主，有少量的嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、支气管上皮细胞。 部分人诱导痰中嗜酸性粒细胞缺如。正常成人诱导痰细胞总 数为非吸烟组3.1012.15x106/g(X