Caveolin-1EGFR突变非小细胞肺癌酪氨酸激酶抑制剂敏感性影响.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………6 研究论文Caveolin-1对EGFR突变非小细胞肺癌酪氨酸激酶抑 制剂敏感性的影响 前言…………………………………………………………………11日日舌…………………………………………………………………ll 材料与方法…………………………………………………………13 结果…………………………………………………………………27 附图…………………………………………………………………29 附表…………………………………………………………………36 讨论…………………………………………………………………49 结论…………………………………………………………………43 参考文献……………………………………………………………43 综述非小细胞肺癌的分子靶向治疗…………………………………47 致谢………………………………………………………………………56 个人简历…………………………．……………………………………．．57 中文摘要 性的影响 摘 要 目的：肺癌是当今全球范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，每年 cell lung 标准一线化疗方案为含铂双药方案，其在延长患者的总生存期、提高患者 生存质量等方面均不理想。近年来随着分子生物学的发展，分子靶向药物 以其特异性强、疗效明显、副反应小等优点在晚期NSCLC的治疗中被广 泛应用。 factor 表皮生长因子受体(epidermalgrowth 氨酸激酶活性的ErbB(HER)家族中的一员。表皮生长因子受体家族包括： 示预后不佳。EGFR通过与其配体结合，形成二聚体，进而激活胞内段的 酪氨酸激酶区，最终激活多条受体介导的信号转导通路，调节细胞的增殖、 分化和存活。表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermalgrowth factor kinase receptortyrosine 合EGFR胞内段酪氨酸激酶区域的ATP结合位点，阻止配体与受体结合 后引起的酪氨酸激酶的磷酸化，抑制EGF与EGFR结合后触发的信号转 应用中，大多数患者在1年内都会出现耐药现象。目前公认的对吉非替尼 制尚未查明。 酸残基组成，中间的疏水残基(102．134)在膜结构上形成特殊的发卡样 中文摘要 镶嵌在细胞膜内，将Cav-1蛋白分成N端及C端两个区域，其中N端的 82．101残基为主要的功能区域，该区域通过与EGFR相连接，从而调控 的NSCLC酪氨酸激酶抑制剂敏感性产生影响。 为证实上述设想，本研究利用体外培养具有EGFR突变的NSCLC细 细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响；(3)Westernblot法检测吉非替尼对 稳定转染细胞EGFR及其下游信号通路中各激酶活化水平的影响。旨在从 酶抑制剂敏感性的作用机制，为解决EGFR-TKIs耐药问题提供新靶点。 方法： 1质粒转染技术建立过表达Cav．1的稳定细胞株 NSCLC细胞PC．9，经G418抗性筛选，得到过表达Cav．1的稳定转染细 PCR和Westernblot检测稳定转染细胞株中Cav一1mRNA和Cav—l蛋白的 水平。 2MTT比色分析法检测吉非替尼对稳定转染细胞增殖能力的影响 光度(0D)值，计算细胞生长抑制率和吉非替尼的半数抑制浓度(IC50)。 3划痕修复实验检测吉非替尼对稳定转染细胞株迁移能力的影响 全1640培养液中继续培养，在倒置显微镜下观察并拍照，每6h拍照一次， 直至划痕愈合，测量划痕宽度变化，计算细胞迁移率。迁移率=(划痕初 始宽度一目前宽度)／2／划痕初始宽度×100％。 4Transwell法检测吉非替尼对稳定转染细胞侵袭能力的影响