结核分枝杆菌哺乳动物细胞入侵因子mce家族Rv0590A基因性质功能.pdfVIP

西南大学硕十学伊论文 摘要 曼nn __ii uu 曼-量曼曼曼曼曼曼曼葛 结 ㈣塾琶韶戳余孽畏毳第P家 微生物学专业硕士研究生 张繁 指导老师谢建平研究员 摘 要 结核病是一种严重危害人类健康的传染病，它是由结核分枝杆菌 (Mycobacterium 药物，使得人类对结核病的控制取得了可喜的成绩。然而，化学药物的不合理应 人口流动的增加使得结核病疫情下降缓慢，在部分地区甚至有所回升。开发出对 结核病有效的预防性、治疗性疫苗和新型药物是亟待解决的难题。寻找新的结核 药物作用靶点和开发新型抗结核药物已成为当前最受关注的热点。 Mmberculos括作为一种胞内致病菌，主要存在于单核吞噬细胞内。它的一 个重要特征是能够在宿主巨噬细胞内存活和增殖，并抑制吞噬小体的酸化和成熟。 M 每个trice操纵子含有8．13个基因，它们相互毗连且在各操纵子中排列相似。每个 操纵子中相对应的基因具有相似的序列及有机组成，编码与Mtuberculosis入侵 coli 以及在宿主巨噬细胞中存活相关的输出蛋白。mce基因使得重组非致病菌E 其巨噬细胞内的持久存活有着密切的关系。Rv0590A作为race操纵子上一个未知 tuberculosis H37Rv的一个中断编码序列 的表达。Rv0590A与mce2B组成M (ICDS)，与其他18个ICDS共同构成M 6D’，捃(M bov括)分化的依据之一。 能进行研究，并对该基因编码蛋白的结构和功能进行分析和预测，以期为该蛋白 的研究提供生物信息学相关的参考依据。运用TMHMM NTI9，Clustal X，SignalP，swiss 质进行了分析，包括对蛋白一级结构(亲水性／疏水性，跨膜结构和信号肽等)， 两南大学硕十学何论文 摘要 曼喜曼曼曼曼曼皇罾曼曼曼曼舅舅曼曼曼曼曼曼曼曼皇量曼曼!曼曼皇曼曼舅舅I—II ； ；I；I； ； II曼鼍量曼皇曼皇曼皇曼曼曼鼍曼 二级结构以及三级结构等基本性质的预测分析。结果表明：结核分枝杆菌H37Rv Rv0590A编码蛋白无信号肽，不存在跨膜结构区；其二级结构是由2个a螺旋及 2个B折叠片构成。同时在一、二级结构分析的基础上，利用同源建模的方法完 用网络，结果表明与其相互作用蛋白主要是同源及与其毗邻的蛋白即mce2操纵 mce2的转录相互印证。利用比较基因组学分析该蛋白在分枝杆菌属中的同源和分 布情况，结果表明该基因在进化上相对保守。 列，设计两对引物，分别以结核分枝杆菌H37Rv全基因组为模板，分别体外扩增 Simple coli BL21(DE3)，对该重组蛋白质进行诱导 pET28／Rv0590A转化Escherichia 表达。扩大培养后，采用Ni+凝胶亲和层析方法纯化获得高纯度的重组Rv0590A 菌的影响，包括过表达Rv0590A对宿主菌生长，脂肪酸组成以及对宿主菌抗氧化 殊作用以及Mce家族的作用机制提供线索。 关键词：race，Rv0590A，结核分枝杆菌，脂肪酸，Ccl5 Ⅱ cell Mammalian