神经干细胞体外培养、分化移植治疗大鼠帕金森病实验.pdf

神经干细胞体外培养、分化及移植治疗大鼠帕金森病的实验研究 神经干细胞体外培养、分化及移植治疗 大鼠帕金森病的实验研究 专 业：神经外科 博士研究生：柯春龙 导 师：黄正松教授 中山大学附属第一医院神经外科510080 摘要 研究背景 帕金森病(Parbnson’Sdisease，PD)是中老年人常见的中枢神经系统变性疾病， 65岁以匕的老人发病率达1％，其基本病理改变是黑质(SN)的多巴胺能神经元 发生退行性病变，使接受黑质多巴胺能神经元投射的纹状体多巴胺含量明显下降； 或纹状体受体的退行性变，导致锥体外系功能失调，从而出现震颤、僵直、运动 障碍等临床症状。I艋床和实验研究显示这种神经退行性病变是多因素造成的，包 括遗传、感染、外伤、药物等。目前其治疗方法仍以多巴胺替代类药物为主，虽 然在多数病例初期试用有效，但并不能减缓黑质区神经元退行性变的进程，随着 使用时间的延长疗效将逐渐下降，且不良反应增强。因此人们开始尝试通过神经 组织移植替代变性的多巴胺能神经元。 上个世纪七十年代Perlow首次报道将胎鼠中脑腹侧多巴胺能神经元组织移植 到帕金森病大鼠模型尾状核内，能使大鼠的异常旋转减少。90年代初开始的胎儿 中脑组织移植治疗PD取得了令人鼓舞的进展。然而，这一方法仍有极大的局限性， 主要原因是细胞存活率低，移植后90％-95％的神经元死亡，每例患者应接受至少 6-8个胚胎中脑才能保证有足够的多巴胺能神经元存活；治疗帕金森病的早期疗效 肯定，但中长期疗效尚不能令人满意；受到伦理道德及供体来源的限制，因此限 制了其临床应用。人们转而寻求新的移植细胞来源。 20世纪80年代末，在研究造血发生和无脊椎动物神经发育的基础上，Panov 神经干细胞体外培养、分化及移植治疗大鼠帕金森病的实验五歼究 提出了神经干细胞(NeuralStemCells，NSCs)的概念。它是指一类多潜能干细胞， 能够长期自我更新，并具有分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力。 的出现彻底改变了以往认为成年中枢神经系统不能再生的理论，从而揭开了神经 干缅胞研究的帷幕。此后十年，研究中枢神经发育和再生的焦点集中在神经干细 胞上。近年来随着神经干细胞技术的飞速发展，来源于胚胎和成体神经干细胞的 成功分离、纯化、培养、传代、建立细胞系以及体外定向诱导分化等技术的成熟， 解决了胎脑移植数量不足的问题，同时避免了伦理学方面的争论，为移植治疗帕 金森病等神经变性疾病带来了新的希望。 神经干细胞的增殖及分化能力使利用神经千细胞替代多种损伤和退行性变的 组织细胞的治疗成为可能。成人脑内存在神经干细胞且具有较大的可塑性，但在 神经元损伤应答时，脑内神经干细胞产生新的神经元的能力有限。在帕金森病患 者脑内有较大量神经元死亡时，仅靠自身神经干细胞没有足够能力完成自我修复， 因此通过植入新的神经干细胞来代替因退行性改变而丧失的多巴胺能神经元在理 论上是可行的，且有以下有利条件：帕金森病的发病机理比较清楚，治疗的目标 明确——恢复纹状体多巴胺递质水平；帕金森病相关的神经核团——黑质及纹状 体的解剖定位明确；已建立了啮齿类及灵长类动物的帕金森病模型，可较好模拟 人类帕金森病症状及评价其治疗效果；胎儿脑组织移植治疗帕金森病已有相当的 临床经验，为神经干细胞移植治疗帕金森病建立了基础。 在大量实验研究的基础上，己有学者开始尝试将神经干细胞应用于临床移植 治疗帕金森病，但随访观察的效果并不尽如人意，这使人们认识到在神经干细胞 真正应用于临床治疗前，还有大量的基础研究问题亟待解决。虽然神经干细胞在 体外增殖及定向诱导分化为多巴胺能神经元己获得成功，但各报道体外培养的神 经干细胞因所采用的组织来源、分离培养方法不同，定向诱导分化为多巴胺能神 经元的结果也不相同，因此，如何建立可靠的神经干细胞分离纯化和扩增的技术 平台，如何诱导神经干细胞定向分化以获得充足的多巴胺能神经元，其调控分子 机制如何起作用，需要进一步深入研究。神经干细胞体内移植治疗帕金森病在方 法学及移植疗效等方面仍存在较大的差异，采用体外扩增的神经于细胞还是经定 向诱导分化的多巴胺能神经元进行移植，神经干细胞移植后在受体体内是否有功