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广西六堡茶化学成分分离、活性分析及茶褐素提取工艺研究 IV 广西师范学院硕士学位论 摘要 六堡茶是中国黑茶之一，具有悠久的生产历史，多种生物活性。针对六堡茶的研究主要 是加工工艺，化学成分的研究较少。本课题对广西六堡茶的有效化学成分进行分析，并对茶 褐素进行提取工艺优化。主要结果如下： 1. 活性分析： 六堡茶经 95% 乙醇浸提后，用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，各萃取相蒸干，4 个极性部分的浸膏分别进行抗氧化、抗菌和抗肿瘤实验。抗氧化实验中分别选取 DPPH 自由 基、羟基自由基、超氧阴离子自由基通过测定吸光度值判断各极性部分的抗氧化能力，通过 数据分析，乙酸乙酯相和正丁醇相具有较好的抗氧化能力，特别是对 DPPH 自由基的清除率 值较高；通过最小抑菌浓度法(MIC)选取革兰氏阴性的铜绿假单胞菌、大肠杆菌以及革兰氏阳 性的金黄色葡萄球菌、白色念珠菌四种菌种对经过水提萃取后的4 个极性部分和 95% 乙醇提 取萃取后的 4 个极性部分进行抗菌活性实验，对大肠杆菌的抑菌效果优于对其它细菌的抑制 作用；浸膏分别对胃癌细胞MGC-7901、人宫颈癌细胞 Hela 、肝癌细胞 7404 进行毒性测定， 通过数据分析，依据 IC50 值判断活性效果，与预期差别较大，对这三种癌细胞的抑制作用较 小。 2. 化学成分分析： 六堡茶提取物经萃取后，石油醚相和乙酸乙酯相通过 GC-MS 分析挥发性成分，并对石 油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相用柱层析进行分离鉴定。化学成分分离得到 9 个化合物，已 鉴定出 5 个化合物，分别是棕榈酸、咖啡因、没食子酸、没食子酸甲酯、α-菠甾醇。 3. 工艺提取纯化： 采用纤维素酶辅助法提取六堡茶中的茶褐素，分别对酶解温度 (A) 、酶解用量 (B) 、pH 值 (C) 、酶解时间 (D) 四个影响因素通过单因素和正交实验对比分析，得到了茶褐素提取的 最佳工艺条件，产率达到 24.50% 。 用大孔树脂对茶褐素进行富集纯化，首先选取 D900 、DM-301、ADS-17、D101 、S-8 五 种不同型号的大孔吸附树脂通过静态吸附，比较吸附率与解析率的综合效果，确定了 D101 作为纯化茶褐素的大孔吸附树脂。其吸附率是 43.65% ，解析率是 67.09% 。确定了茶褐素溶 液浓度、洗脱剂、洗脱速度、pH 值对纯化的影响。 选用葡聚糖凝胶柱层析的方法对茶褐素进行分级分离，丙酮-水做洗脱剂，按照色谱带的 不同得到了 个级分，分别通过紫外和红外光谱观察，数据分析表明茶褐素的组成与结构复 杂。 关键词：六堡茶；活性分析；化学成分；提取；纯化；分级 I 广西六堡茶化学成分分离、活性分析及茶褐素提取工艺研究 II 广西师范学院硕士学位论 Abstract Liubao Tea belongs to one of famous black tea in China, which has a long history of production and a variety of biological activity. Processing technology is the primary research, while studies on chemical composition is limited. In this paper, the active chemical composition of Liubao Tea and the purification process of Theabrowns extraction were studied. The ma