p38nfκbil-6在运动介导大鼠骨骼肌生物发生的作用.docVIP

p38NFκBIL-6在运动介导大鼠骨骼肌生物发生的作用 【摘要】：肌肉发生是肌肉可塑性和肌肉发育的重要的生物学基础。狭义的肌肉发生最初是指在胚胎发育过程中,体节细胞经过一些列增殖、迁移、分化,最终形成肌肉组织的过程,广义的肌肉发生还包括了成体肌纤维的发生的内容,包括了成体干细胞(主要指卫星细胞)成长为成熟肌细胞、肌纤维核上调某些肌肉特异性结构、功能蛋白表达等过程。医学、农学、体育学的多方面研究都涉及到肌肉发生,如肌肉创伤、老年退行性少肌症和肌营养不良症的治疗、畜禽养殖、运动介导的肌肉适应性变化等。肌肉发生涉及了一系列复杂的分子事件,对细胞外信号系统如GH/IGF-1通路等已经有深入的研究,但是细胞内分子事件迄今为止我们仍对此知之甚少。p38/NF-κB/IL-6是近年来发现的肌肉发生的细胞内信号通路,自此发现以来就受到广泛的关注。运动条件下该通路的研究国内外未见报道,且肌肉发生也是体育研究中最重要的领域,因此本研究以此通路为主干进行研究,对其在运动中的动力学特征进行检测,并对其作用进行分析。具体来说,本研究的目的为:1、探索急性大、中强度运动后,肌肉发生通路因子p38、NFκB、IL-6和肌肉发生因子及辅助因子MRFs、MEF2c的相位变化,肌肉发生组织学微观指标卫星细胞数量和形态的变化及肌肉损伤组织学标志肌丝和Z线排列的变化。探讨上述运动方案中,p38、NFκB、IL-6在生物发生的作用、三者之间的信号联系、不同运动强度肌肉发生效果和机制的差异。2、D38/NFκB/IL-6进行逐级阻断,检测急性大强度运动后的NFκB蛋白总量、磷酸化水平、IL-6mRNA及肌肉发指标——MRFs和MEF2cmRNA、卫星细胞数量和形态、损伤的组织学微观结构肌丝和Z线排列的变化。对p38/NFκB/IL-6的通路存在及各因子作用进一步确认。3、检测2周大强度运动后,p38蛋白水平、磷酸化水平、NFκB蛋白水平、磷酸化水平、IL-6mRNA及肌肉发生生化指标——MRFs和MEF2cmRNA、肌肉发生的组织学微观结构指标——卫星细胞数量和形态、肌肉发生宏观指标——腓肠肌和体重、损伤的组织学微观结构肌丝和Z线排列的变化,探讨长期运动后p38、NFκB、IL-6在肌肉生物发生的作用、三者之间的信号联系、比较与急性运动的异同。本研究分为三部分,研究方法与结论如下。一、急性大、中强度运动对大鼠骨骼肌生物发生的影响方法:1、选用雄性SD大鼠66只,按体重分层后,每组6只,分为11组(尽量减小组间的体重的差异):对照组(C1组)、急性大强度运动即刻组(H-0h组)、急性运动后1h组(H-1h组)、急性运动后6h组(H-6h组)、急性大强度运动后16h组(H-16h组)、急性大强度运动后24h组(H-24组)、急性中等强度运动即刻组(M-0h组)、急性中等运动后1h组(M-1h组)、急性中等运动后6h组(M-6h组)、急性中等强度运动后16h组(M-16h组)、急性中等强度运动后24h组(M-24组)。所有运动组适应性训练后,休息两天,开始一次1h的大强度或中等强度的运动。运动后取腓肠肌肌肉,检测p38蛋白总量、磷酸化水平(方法:WESTERNBLOTTING)、NFκB蛋白总量、磷酸化水平(ELISA)、IL-6mRNA及肌肉发生生化指标——MRFs和MEF2cmRNA(方法:RT-PCR)、肌肉发生的组织学微观结构指标——卫星细胞数量和形态、损伤的组织学微观结构肌丝和Z线排列的变化(方法:透射电镜)。结果和结论:急性运动后,大强度运动后,p38活性、NF-KB活性、IL-6mRNA上调时段(0-6h)一致,但是逐点检测变化趋势发现有不同不之处。MRFsmRNA在1-16h时段上调、MEF2c在1-6h上调。中等强度运动后,p38活性在0-6h、NF-KB活性在0-1h、IL-6mRNA在0-1h上调,MRFs6h才开始上调,并且只有MyoD上调,MEF2c在0-1h上调。大、中等强度运动度运动后,Myf-5均不变。在相同相位点,大强度运动造成因子变化更剧烈。两种强度运动后卫星细胞形态没有显著变化。各因子上调时段的重叠情况及变化幅度、上调次序提示,p38/NF-KB/IL-6/MyoD、MyoG、MRF4、MEF2c可能是急性大而非中等强度运动介导肌肉发生重要通路,大强度对因子刺激更强烈,对于肌肉发生效果更明显。卫星细胞形态无显著变化提示,非损伤性的运动,卫星细胞激活较晚。损伤可能是运动激活卫星细胞重要因素而非必要前提,也可能说明,是肌纤维而不是卫星细胞是急性运动介导下p38/NF-KB/IL-6/MyoD、MyoG、MRF4、MEF2c信号通路活动的主要场所。二、p38/NF-κB/IL-6阻断对急性大强运动诱导肌肉发生的影响方法:选用雄性SD大鼠66只