重组人干扰-γ的蛋白折叠液相色谱法.pdfVIP

重组人干扰素吖的蛋白折叠液相色谱法 摘要 依据蚤白质在液拥色谱上的折叠机理，通过对重组人干扰豢吖@co灿i黼藕毫 酗隧an i蕤锄瞧鼯纛《，瘫lFN一)包涵体抽提液的琉永色谱复性并丽时缝纯研究，着重 探讨了用蛋白折叠液相色谱法《蠢蛾遮folding liqui娃ch抛艘瞧og溯陋孓pF王￡)提瘫 复性并同时纯化跚FN吖的效率和在用Ec嘏生产的重组蛋囱复牲时蛋自质量回 收率的方法。 本论文包括以下六部分： l、文献综述：篱要介绍7我国羹缀蛋趣药物的概况和重组蛋白复性的意义， 对近年来重组蛋鑫及烈烈絮的复性方法进行了系统遗介绍。零|用文献重37篇。 2、对蛋叁蠼撬叠的理论基础，特别是蛋叁质的疏承色谱折叠规遐进行了详 述，依此掩本研究的理论依据。 3、为找出用PFLC对黼剐吖进行疏水色谱复性并同时纯化过程中蛋囱质 量的损失骧因，分别在疏东槛不麓静七释蔬水色谱蘧定褶pEG．2∞、PEG_4∞、 的选择实验。在保证高浓度变性荆7．O m01．L．‘盐酸胍(GuHCl)和杂蛋囱的质量或 体积突破不影响蜊吖在该七种色谱柱上傈留的情况下，确定了最佳迸样体积。 通过对删吖纯度、比活和质量回收率影响结果的比较，发现端基为琵G龙00 interactionchrom phaseofhydrophobic 离并同时纯化效率，再次验证了疏水性弱的STHIC有利于重组蛋自的复性并圊 时纯化的事实。 4、在P嚣@200懿ST磁e上，也考察了琉承色谱流动褶组成、梯度模式、 流速和pH对复性并同时纯化越烈吖的纯度、毖活和麓量回收率的影响，进一 步优化丁复性并同时纯化删吖的色谱条件，为点l烈噌酶规模化复性并间时 纯纯奠定了基础。 l 复谯并同时纯化制备的rh蜊w丫，苒经过尺寸排阻色谱除盐和冷冻干燥后得到 蠢耋粼吖拳袋器，并对逄薹]隈咩半残品避行了色谱秽震谱鉴定。箍粟凳；一步复 性并同时缝纯嫩l烈噬的旗量霉收率达到鸲。7％，纯度95％，比潘茭 4．3×107I。U。／nlg；经SephadexG-25色谱柱除盐后的rhIFN吖质量回收率为92．O％， 缝度瞧在95％豁上；冷冻干漂焘靛蠡娃辩譬，革体统度95冁，二聚体纯度《．5％， 比活必9。5×108 l。醛。勉g。最蜃，通过与文献工艺鲍比较，迁嚼用该工艺制蚕燃默≮ 是一条简单、高效的工愁路线。 6、对蛋宣质在色谱辨上豹分离连缝及英彩响茵素进行了研究，结果进一步 迂骥了色谱镌具誊快速分离、大体积进撵署羹适宜予慰裹糕度群晶分离鲢特点。餍 F．进行纯 弱疏水性的PEG200疏水色谱饼对订“FN吖复性并间时纯化，并对rhSC 诧，褥到了蓰葑豹实验结果。 关键词：重组人干扰素吖，蛋白折叠液相色谱，疏水色谱-固定相，流动相，折 叠，纯纯，质量西收率，眈活，纯度，色谱饼 Ⅱ Pro专ei矬FOld速g ofReeol珏b斑a魏重 LiquidCljI№薹珏a耄。鬈r魏phy Hu撒an In钯哦№鼗吖 Abstract BaSedon也emechanismofproteinfoldingbyliquidchroma毫。铲印取呶e e盛eie鹅y EcD嚣was intI。彘ron吖(rhINF吖)produe甜byinVestig鑫ted．1tm越稳ly怒cused强t糙 memodsfor the in re凡lded tl瓣m鹳s incre薯lsing