1.2基因工程基本操作程序附件.pptVIP

1.2 基因工程的基本操作程序 * * * * * 四个主要步骤: 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取: 1.目的基因：主要指编码蛋白质的结构基因. 目前被较广泛提取使用的目的基因有：生物抗逆性相关基因、与优良品质相关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、与毒物降解相关的基因、与工业用酶相关的基因等。如苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因、生物各抗性基因等。 链接：基因结构 2.目的基因的来源： 一、目的基因的获取: ①从自然界已有的物种分离 ②人工方法合成 3.获取目的基因的常用方法： ①从基因文库中获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 一、目的基因的获取: （一）从基因文库中获取目的基因 1.基因文库： 2.基因文库的分类： 按照外源DNA片段的来源： ●从特定组织提取的染色体基因组DNA---基因组文库（包含了一种生物所有的基因） ●mRNA反转录成的cDNA拷贝----cDNA文库（包含了一种生物的一部分基因，即部分基因文库） 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 限制酶 基因组DNA 基因重组 转化细菌 体外包装 1)基因组文库(Genomic library) 是指将某种生物体的全部基因组DNA用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的DNA片段，再与合适的载体在体外重组后，导入受体菌的群体中储存，这个群体就称为该生物基因组文库。其目的是分离有用的目的基因和保存某种生物的全部基因。 一、目的基因的获取 （一）从基因文库中获取目的基因 ●基因文库 一、目的基因的获取 （一）从基因文库中获取目的基因 ●基因文库 cDNA(complementary DNA，互补DNA)： 是由生物的某一特定器官或特定发育时期细胞内的mRNA经体外反转录后形成的互补DNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做这种生物的cDNA文库 2)cDNA文库 (cDNA library) 基因重组 反转录酶 mRNA cDNA 基因组文库与部分基因文库的关系 DUCK179制作 3.怎样构建基因文库? ①：直接分离法 供体细胞中的DNA 许多DNA片段 各自与运载体结合成重组DNA分子 限制酶 受体细胞 受体细胞产生特定性状 导入 外源DNA扩增 目的基因 分离 (鸟枪法) 一、目的基因的获取 （一）从基因文库中获取目的基因 多用于原核生物 反转录法 目的基因的mRNA 目的基因 化学合成法 肽链氨基酸序列 mRNA序列 基因的核苷酸序列 目的基因 合成 反转录 3.怎样构建基因文库? 一、目的基因的获取 （一）从基因文库中获取目的基因 ②人工合成法（真核生物） 推测 推测 单链DNA 合成 4.基因组文库和部分基因文库的比较 一、目的基因的获取 （一）从基因文库中获取目的基因 物种间基因交流 基因多少 基因中内含子 基因中启动子 文库大小 基因组文库 cDNA文库 文库类型 小 大 无 有 无 有 某种生物的部分基因 某种生物的全部基因 可以 部分基因可以 寻根问底—— （1）为什么要构建基因文库？直接从含有目的基 因的生物体内提取不行吗？ 提示：构建基因文库是获取目的基因的方法之一，并不是唯一的方式。如果所需要的目的基因序列已知，就可以从含有该基因的生物的DNA中，直接获得，也可以通过反转录，用PCR方式从mRNA中获得，不一定要构建基因文库。但如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，或想从一种生物体内获得许多基因，或者想知道这种生物与另一种生物之间有多少基因不同，或者想知道一种生物在个体发育的不同阶段表达的基因有什么不同，或者想得到一种生物的全基因组序列，往往就需要构建基因文库。 一、目的基因的获取: （一）从基因文库中获取目的基因 5.如何从基因文库中得到所需要的基因？ 依据：目的基因的有关信息。 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性。 一、目的基因的获取: （二）利用PCR(聚合酶链式反应)技术扩增目的基因 1、过程 变性（高温使双链DNA解旋为单链） 复性(退火)（引物与单链互补结合） 延伸（在Taq酶的作用下合成 与模板互补的DNA双链） 重复循环 1、过程 一、目的基因的获取 （二）利用