人工锌指核酸酶介导的基因组定点修饰技术.pdf

选 HEREDITAS(Beijing)2011年7月，33(7)：665—683 ISSN0253-9772 1^n^n^，．chinagene．ca 综 述 DoI：10．3724／SP．J．1005．2011．00665 人工锌指核酸酶介导的基因组定点修饰技术 肖安，胡莹莹，王唯晔，杨志艽，王展翔，黄鹏，佟向军，张博，林硕 北京大学生命科学学院细胞增殖与分化教育部重点实验室，北京 100871 摘要：锌指核酸酶(ZFN)由锌指蛋白(ZFP)结构域和FokI核酸内切酶的切割结构域人工融合而成，是近年来发 展起来的一种可用于基因组定点改造的分子工具。ZFN可识别并结合特定的DNA序列，并通过切割这一序列的特 定位点造成DNA的双链断裂(DSB)。在此基础上，人们可以对基因组的特定位点进行各种遗传操作，包括基因打靶、 基因定点插入、基因修复等，从而能够方便快捷地对基因组实现靶向遗传修饰。这种新的基因组定点修饰方法的突 出优势是适用性好，对物种没有选择性，并且可以在细胞和个体水平进行遗传操作。文章综述了ZFN技术的研究进 展及应用前景，重点介绍ZFN的结构与作用机制、现有的靶点评估及锌指蛋白库的构建与筛选方法、基因组定点修 饰的策略，以及 目前利用这一技术已成功实现突变的物种及内源基因，为开展这一领域的研究工作提供参考。 关键词：锌指核酸酶；锌指蛋白；基因组定点修饰；基因打靶；分子工具 Progressin zinc fingernucleaseengineering for targeted genome modification XIAO An，HU Ying—Ying，WANG Wei—Ye，YANG Zhi—Peng，W ANG Zhan—Xiang， HUANG Peng，TONG Xiang-Jun，ZHANG Bo，LIN Shuo KeyLaboratoryofCellProlfierationandDfiferentiationofMinistryofEducation，CollegeofLfieSciences，PekingUniversity，Beo'ing 100871，China Abstract：Zincfingernuclease(zFN)isanartificiallyengineeredhybridproteinthatconatinsazincfingerprotein(ZFP) domainandaFokIendonucleasecleavagedomain．Ithasrecentlyemergedasapowerfulmoleculartoolfortargetedge— nomemodifications．ZFNsrecognizeandbindtospecificDNAsequencestogenerateadouble—srtandbreak(DSB)byits nucleaseactivity．Basedonthisfinding，variousgeneticmehtods，includinggeneatrgeting(genedisruption)，geneaddition， genecorrectionetc．，arebeingdesignedtomanipulatethegenomesofdifferentspeciesatspecificloci．Oneparticularad— vantageofhtisnew techniqueisitsbroadapplications，whichcanbeemployedtogeneratedesirableinheriatblemutations bothattheorganismallevelandathtecellularleve1．Here，wereview therecentprogressandprospectsofZFN technology． Thisarticlefocusedonhtemechna ism ofhow itworks，currentlyavailabletargetassessment，ZFPlibraryconstructionand screeningmehtods，targetmodification strategies，aswellasacollectionofspecienadgenesthathavebeensuccessuflly modifiedbyZFN．Thisreview willprov