氨基酸类和丙二胺类阳离子脂质体的合成及其基因转染效率评价.pdfVIP

摘要 基因治疗在肿瘤治疗和遗传病治疗方面有很好的前景，引起了广 泛关注。基因治疗面临的最主要的难题是寻找一种高效、低毒的基因 转染载体，将基因药物导入特定的细胞中，并能稳定地维持其功能。 目前，广泛用于临床的基因载体主要分为病毒载体系统和非病毒载体 系统。而作为非病毒性载体之一的阳离子脂质体在临床试验中具有较 好的发展前景。 本论文合成了两类阳离子脂质。一类是以氨基酸为原料，通过 Fmoc．氨基保护、酰胺化、Fmoc．氨基脱保护、氯乙酰化和季铵化反 12和TMA．Val．di．C 应，合成TMA．,8-Ala．di—C 12两种氨基酸类阳离 子脂质。另一类则以环氧氯丙烷为原料，通过酸催化开环反应、叔 HEDMA．Apd．di．C12两种丙二醇胺类阳离子脂质。 采用超声波分散技术，将白合成的阳离子脂质分散成阳离子脂质 体，再将脂质体与装载EGFP的质粒DNA混合制备成脂质体／DNA复合 物。用ZetasizerNano ZS激光粒度仪测定了各阳离子脂质体和脂质体 ／DNA复合物的平均粒径、粒径分布和Zeta电位，用原子力显微镜观 察阳离子脂质体及其DNA复合物的形态。结果表明各脂质体及其 DNA复合物均有适用于细胞转染的平均粒径，脂质体尺寸为60．150 nl／1，脂质体／DNA复合物为100．350nin；原子力显微镜表明脂质体及 其DNA复合物呈微球形态。通过凝胶阻滞实验，研究阳离子脂质体与 质粒DNA的结合能力和确定各脂质体／DNA复合物N／PLL范围。实验结 果显示，随着复合物中转染试剂比例(即N／PLk)的增加，DNA延滞作 用明显增强。当N／P比增至2时，各脂质体与质粒DNA已完全结合。 以自合成的四种阳离子脂质体为基因载体，分别对HEK293、 A549、U251、Huvec、Ges．1、Hctl FT293、NIN3T3、MCF．7和HTl080十四种细胞系进行转染试验，转 照。结果显示，四种阳离子脂质体在大部分细胞系中的转染效率与 检测。结果显示，自合成的氨基酸类阳离子脂质和丙二醇胺类阳离子 脂质有低于Lip02000的细胞毒性。 自合成的四种阳离子脂质体表现出较高的转染效率和低细胞毒 性，有进行体外转染和基因治疗的潜力；为非病毒性载体阳离子脂质 的研究提供参考。 关键词：基因治疗，阳离子脂质体，氨基酸，丙二醇胺，基因转染， ABSTRACT Thewell of asthe totackle prospectgenetherapy way genetic diseasesandthecancerhasbeen most widelyinvestigated．The important metin ishowtofindout a andlow problemgenetherapy hi曲effeetive toxic introduces into genedeliveryvector,which geneticdrugsspecific cellsandcan maintainits vectorsare stably function．Now,genedelivery classifiedintoviralandnon—viralvectors．Thecationic isone