MfDREB1因克隆和转基因棉花抗逆性分析.pdf

。 J|IlllllItlIt／IllIIIIIJ IIIllllJlllllllllJIII Y2761791 蚴脚J基因的克隆和转基函棉花的抗逆毒棼薪 ～～ 摘要 逆境胁迫是影响农作物正常生长发育和限制农作物产量的主要因素之一。受低温胁 迫的植物能量产生和物质合成受阻，消耗增强，植物处于饥饿状态，严重影响了植物正 常生长发育，长期的进化过程中，植物体为适应低温环境，具备了能通过其提高可溶性 糖、可溶性蛋白和增加脯氨酸含量等方式抵抗寒冷等能力。DREB类转录因子是与植物 对低温、干早和高盐胁迫应答有紧密关系的蛋白，脚转录因子能与DRE／CRT顺式 作用元件特异结合，启动下游许多与其抗逆性有关报告基因的表达，从而使植物的抗逆 性得到增强。 我国是世界最大的棉花生产国，虽然平均产量比世界平均水平高50％左右，但我国 棉花还不能满足国内的需求。新疆作为国内最大的棉花生产基地，在1亿多亩耕地中， 棉花种植面积就可达2538万亩，但大规模的棉花种植一方面加剧了新疆地区耕地的扩 张和水资源的消耗，进而加剧了新疆地区的环境和土地退化，另一方面，气候地理条件 使成株期棉花发育延迟、易感病、落花落蕾、品质和产量大幅下降。因此，干旱、盐碱 等逆境已成为妨碍新疆种植业可持续发展的重要逆境因子之一的今天，在新疆开展主棉 花的抗逆基因工程育种方法来增产是比较理想的途径。 mmol／LNaCl胁迫24h，提取其总RNA，用特异性引物进 本研究以黄花苜蓿在150 行反转录聚合酶链式反应，回收目的片段，对其进行序列分析，回收的目的片段与 pMDl9．T载体连接，然后利用菌液PCR、双酶切等方法检测重组载体。测序结果显示 cDNA核心片段长度为651 性最高达99％，氨基酸序列同源性最高达99％。初步证明目的基因是DREB基因家族的 [】 一贝。 农杆菌是一种天然的植物遗传转化工程菌，目的基因能借助农杆菌的感染转移与整 PCR和酶切鉴定，证明了构建成功，为下一步进行植物抗逆基因工程的研究创造了条件。 构建植物表达载体后，通过花粉管通道法将35S：：MfDREBl质粒导入受体棉花D5， 通过硫酸卡那霉素筛选初步鉴别转基因阳性植株并进行PCR分子检测，其与田间硫酸 万方数据 卡那霉素筛选结合获得卡那霉素抗性的转基因棉花植株共97株系，进一步通过三重PCR 筛选最终确定5个株系。为转基因棉花后代的筛选鉴定提供理论依据。 对转MfDREBl基因棉花幼苗在干旱、盐、低温胁迫下脯氨酸、丙二醛、叶绿素含 量的进行检测，结果表明，在干旱胁迫下，转MfDREBl基因棉花这3项指标都优于非 转基因棉花，在盐胁迫下叶绿素含量优于非转基因棉花，低温胁迫下丙二醛含量优于非 转基因棉花。田间试验表明转MfDREBl基因棉花在干旱胁迫下产量比对照高，综合分 析，转MfDREBl基因可提高棉花的抗逆性。 关键词：MfDREBl基因；克隆：抗逆性；转基因棉花 珏 万方数据 of Genein L．and ofStressResistancein CloningMfDREBl Analysis MedicagofaIcata Cotton Transgenic Abtract stressisoneofthemainfactors thenormal and and Adversity affecting growthdevelop