PtrDFR基的克隆与其在毛白杨中功能鉴定研究.pdf

摘要 尸右棚船基因的克隆与其在毛白杨中功能鉴定研究 植物学专业硕士研究生孙一铭 指导教师 罗克明教授 摘要 花青素具有抗氧化、改善血液循环、治疗糖尿病性视网膜病、消肿化淤和抑 制静脉曲张等功能。由花青素生成的花色苷具有多种生态功能，包括光保护作用、 提高植物耐寒抗冻能力、提高植物的抗旱及渗透应激能力、清除自由基、抗氧化 作用和抗病虫害作用。原花青素具有抗脂质过氧化和清除自由基、降血压、降血 脂、消炎、抗肿瘤、预防心血管疾病以及抗辐射、抗衰老、抗疲劳等功效。 花青素和原花色素的合成受到黄酮类化合物生物合成途径中重要关键酶即二 氢黄酮醇4．还原酶(DFR)的调控，其在草本植物拟南芥当中研究得较为清楚， 但是在木本植物中还有待进一步论证。 本研究根据黑杨(Populus tomentosa 保守区域设计用于扩增毛白杨(Populus Carr)DFR基因的引物： 转录合成eDNA第一链，进行PCR扩增得到两个基因，分别命名为咒国职』和 PtrDFR2。PtrDFRI包括一个1041 bp的ORF，编码346个氨基酸，其蛋白大小约 为38．7kDa；PtrDFR2存在一个1131 bp的oI疆，编码376个氨基酸，其蛋白大小 约为41．9 模型，得到PtDFRl和PtDFR2的三维构象，包括NADP结合位点和决定底物特 和美洲白杨为同科同属能聚为一簇。 在毛白杨根、茎、叶、老叶、幼叶柄和老叶柄中的表达，半定量PCR结果表明 两南大学硕七学何论文 分别转入到大肠杆菌JMl09和BL21中，结果皆没有检测到与理论相当的蛋白表 达，原核表达的工作正在进一步改进中。 将尸护D职J『和尸护DF船构建到植物表达载体pBll21，形成正义表达载体 青素及原花色素含量定性分析表明PtrDFRl超量表达引起毛白杨花青素及原花色 素含量的提高，正义PtrDFR2对毛白杨花青素及原花色素含量的影响不显著，对 原花色素含量有较小的提高。 关键词：毛白杨：二氢黄酮醇4一还原酶：基因克隆：功能鉴定：花青素 II Abstract the MolecularandFunction of Gene Cloning Analysis Encoding 4-reductasefrom tomentosa dihydroflavonol Populus Major：Botany；Postgradute：SunYi—ming Supervisor：Prof．LuoKe··ming Abstract Intheflavonoid metabolite 4一reductase secondary (DFR)isa thatcontrolsfluxinto branches enzyme biosynthetic leading key pathway has to and functionofDFRbeencharacterized anthoeyaninsproeyanidine．The