USP19在DA双链损伤应答中的功能及机制研究.pdf

目录 缩略词表…………………………………………………………………………………1 摘要………………………………………………………………………………………………………………．5 Abstract…………………………………………………………………………………………………………．7 前言………………………………………………………………………………………………………………．9日Ⅱ舌………………………………………………………………………………………………………………． 材料与方法……………………………………………………………………………。12 1．材料及来源…………………………………………………………………12 1．1质粒和细胞…………………………………………………………12 1．2主要试剂和抗体……………………………………………………12 2．实验方法……………………………………………………………………12 2．1质粒构建……………………………………………………………．．12 2．2细胞培养……………………………………………………………．．12 2．3免疫共沉淀(co．IP)………………………………………………．．22 2．4质粒转染……………………………………………………………．．13 2．5siRNA转染………………………………………………………………………………．．13 2．6流式细胞术分析周期………………………………………………．．14 2．7免疫荧光染色………………………………………………………．．14 2．8Western Blot蛋白印迹………………………………………………．15 结果……………………………………………………………………………………………………………．．17 1．siRNA文库筛选影响细胞有丝分裂的基因………………………………17 1．1 USPl9敲低导致细胞有丝分裂指数(MI)升高…………………17 1．2USPl9敲低导致染色体分离错误……………………………………18 2．USPl 9敲低对DNA损伤应答及修复的影响………………………………．20 2．1USPl9受DNA损伤诱导表达…………………………………………20 2．2 2．3USPl9敲低影响DNA损伤应答通路中的蛋白磷酸化………………22 2．4USPl9敲低影响DNA双链断裂修复…………………………………24 4．USP29与肿瘤发生发展……………………………………………………．．27 讨论……………………………………………………………………………………………………………．．219 1 万方数据 参考文献………………………………………………………………………………31 结论……………………………………………………………………………………………………………··37 万方数据 缩略词表 英文缩写 英文全名 中文译名 USPl9 19 泛素特异性蛋白酶19 ubiquitinspecificpeptidase DDR DNA—damageresponse DNA损伤应答 HR recombination homologous 同源重组 NHEJ en