RNAi干涉家细胞AGO蛋白家族的表达研究.pdf

摘要 (small interfering 3’端悬垂的两个核苷酸，因此AGO蛋白参与到small 蛋白功能的研究将更加有利用于揭示牛物体内的基因调控机制，从而为人类疾病治疗和 生物遗传发育的研究提供更加有利的条件。 家蚕作为人类最早驯化的动物之一，具有重要的经济价值。同时作为鳞翅目的模式 生物，在研究昆虫的变态发育及农林业害虫防治中也发挥着重要的作用。目前，在家蚕 还不是很清楚。在本研究中以家蚕细胞BmN为研究对象，通过构建RNAi-T．扰载体， RNA和靶标 试图探究蛋白AGOI和AG02在家蚕细胞中的功能，为进一步研究small 基冈之间的作用机制提供初步基础。 RNAi载体在家蚕细胞中转录成特 RNAi载体的构建主要是根据基因沉默的原理， 胞内表达转座酶，将构建成功的RNAi载体和辅助质粒共转染到家蚕细胞BmN中，在 辅助质粒的作用下，可以将干扰片段整合到基因组上，稳定表达。 利用脂质体转染的方法，将构建好的载体和辅助质粒共转染到家蚕细胞中，转染 48h后开始观察细胞，直到96h后观察到绿色荧光，连续观察并记录细胞形态变化，7 显降低。通过记录细胞形态，发现有绿色荧光的细胞比周围的细胞有变大、变圆的趋势， 这为后续对不同AGO基因进行T涉或过表达研究家蚕中小RNA表达水平的变化提 供了很好的平台。 关键词：RNA干涉，AGO蛋白，基因表达 n ABSTRACT isa basic four N·terminal Argonautehighly proteinfamily,containingmainlydomains，the domain、thePAZdomain、themiddledomainandthePIWIdomain．PIWIiSanRNaseHdomain．1tcan themRNA with binds the cleave interactingsiRNA(smallinterferingRNA)；PAZunspecially two—nucleotideofan AGOinvolvesinthe AGOisthecoreof siRNA，SO 3’overhang generegulation，and RISC(RNA—inducedsilencing researchofAGOwillmakethemachenismofgene complex)．The known thecureofdiseasesandtheresearchof well，and regulation promote genetics． has value． moriisoneoftheearliest economic animals，itgreat Bombyx domesticating Meanwhileasthemodleofthe an roleinthe ofthe insects，silkwormplaysimportant study