中药材鱼腥草株的遗传多样性及其质量稳定性控制研究.pdf

摘要 本文以鱼腥草为材料，从中药材植株间遗传多样性角度探讨了鱼 腥草的质量稳定性问题，在原GAP控制模式的基础上，建立了中药 材的“最小一次投料量”数学模型及理论体系，进一步控制了中药材 质量稳定性，也更深层次地完善了中药材的质量稳定性控制理论。本 文首先从DNA、蛋白质角度与化学成分角度两个层面揭示中药材的 原植物体具有遗传多态性现象；然后根据具有DNA多态性的中药植 的“最小一次投料量”的数学模型；最后运用该数学模型展开对鱼 终建立以此值为最小投料单元的中药材质量稳定性控制理论。为中药 材质量稳定性控制提供一种新思路、新方法与实验数据。实验结果如 下： 1．鱼腥草植株间DNA多态性研究：对同一GAP产地46株鱼腥 结果表明，将筛选出的9条ISSR引物及8条RAPD引物扩增后分别 得到134和101条带，其中呈多态性的条带数分别为115和72条， 多态比率分别为85．8％、71．3％，平均遗传相似系数分别为O．6786、 0．6947。两种分子标记结果均揭示了同一GAP产地鱼腥草植株问具 有基因多态性。 2．鱼腥草植株间蛋白质多样性研究：采用Ramagli改进的 对鱼腥草植株间的蛋白质进行多样性研究，结果发现，53株蛋白条 带分子量大多集中在6．5KD．97．2KD范围内，其蛋白种类差异性不明 显，主要表现为条带颜色深浅不一；蛋白电泳条带的扫描图的总量 鲜鱼腥草个体问蛋白质种类变化不大，但相应的含量显示出丰富的多 样性。 3．鱼腥草植株问挥发性油指纹图谱多样性：提取得到77株鱼腥 草挥发油，并建立了77张挥发油成分的气相色谱指纹图谱，运用总 量统计矩指纹图谱分析法进行研究，结果表明，77株鱼腥草挥发油 的RSD为5 见，种植在同一GAP产地的鱼腥草挥发油气相色谱指纹图谱问存在 较大的变异性。 4．基于鱼腥草RAPD扩增条带信息熵的平衡群体研究：采用 RAPD分子标记对同一GAP产地鱼腥草进行多态性分析，将扩增的 条带信息转化成信息熵，运用数学模型测算鱼腥草的“Hardy— Weinberg”平衡群体，即最小一次投料量。结果发现，将筛选出的8 条RAPD引物对同一GAP产地46株鱼腥草的DNA样品进行扩增， 次最小投料量约为3．736kg。 5．基于鱼腥草ISSR扩增条带信息熵的平衡群体研究：采用ISSR 分子标记对同一GAP产地鱼腥草进行多态性分析，将扩增的条带信 息转化成信息熵，运用数学模型测算鱼腥草的最小一次投料量。结果 样品进行扩增，得到134条总条带，其信息熵为H，_0．3656～0．9786， 863株，折算成一次最小投料量约为11．22kg。 6．基于鱼腥草挥发油气相指纹图谱信息熵的平衡群体研究：运 用信息熵及遗传统计学原理，以同一GAP产地鱼腥草植株间挥发油 GC指纹图谱信息量变异系数为枢纽，建立中药稳态提取工艺中平衡 群体的数学模型，并进行实验验证，结果发现，获得该产地的遗传平 衡群体为29683株，折算成一次最小投料量约为118．7kg。 本文从鱼腥草挥发油的指纹图谱的变异性、鱼腥草总蛋白的差异 性和鱼腥草的RAPD和ISSR的基因多态性等三个角度揭示了鱼腥草 植株问存在生物遗传多样性规律；同时将RAPD、ISSR和挥发油气 相指纹图谱的信息量与信息熵原理相结合，运用统计学原理，建立相 关数学模型，通过实验求算出三个批次的鱼腥草的“Hardy．Weinberg” 平衡群体分别为287株、863株、29683株。由结果可知，所得三个 不同批次的平衡群体值有很大的差异，究其原因可能有两种：一是内 因，不同批次，不同环境平衡群体数值应该会不同：二是测算的角度 不同，中药多态性有多种表达形式，不同的表现形式会测算出不同的 平衡群体值，最终要经过实验验证、以及临床疗效检验。才能真正实 现完全控制中药质量的稳定性，使得中药材“一次投料量”理论可行 性、科学性。 关键词：中药材质量稳定性，鱼腥草，信息熵，Hardy—Weinberg， 一次投料量 Il【 Abstract usedasthe ectiveto Inthis cordatathunbwas obj st