产菊粉酶菌株的育及其产酶条件的研究.pdf

摘 要 论文题目： 产菊粉酶菌株的选育及其产酶条件的研究 专 业： 生物化学与分子生物学 研 究 生： 曾小宇 指导教师： 刘建学 、罗登林 摘 要 菊粉由 D-果糖经 β （1→2 ）键连接而成的多糖，利用菊粉作原料通过菊粉 酶一步法降解可直接制得低聚果糖和超高纯度果糖浆。低聚果糖是一类天然性的 功能低聚糖，它具有改善肠道微环境、调控血脂和血糖水平、预防肥胖症、促进 矿物质吸收和维生素合成等突出生理功能；而果糖具有甜度高且风味纯正、抗龋 齿、代谢途径不受胰岛素控制等优点。目前自然界中能产菊粉酶的微生物很多， 但真正能够高产菊粉酶的菌株却很少，为了获得一株高产菊粉酶菌株，本文主要 开展了以下三个方面的研究： 1. 超声强化提取菊芋中菊粉的研究 为了探讨超声对菊芋中菊粉提取的影响，试验采用单因素试验和响应曲面法 对其提取工艺进行了研究，建立并分析了各主要影响因子与菊粉提取率关系的数 学模型。试验结果显示，回归方程 p=0.00021 ﹤0.01 ，决定系数 R2 为 98.94% ， 说明所建模型与试验值的拟合度很好。超声提取菊粉的优化工艺为：总提取时间 为 10min ，超声辐照方式为 15s/6s ，超声功率为 750W ，料液比(w/v) 为 1: 30.15 ，提取温度为40 ℃，在此条件下菊粉的提取率为94.23% 。与常规热水提取 法相比，提取率提高了26.25 个百分点。 2. 产菊粉酶菌株的选育 为了获得一株高产菊粉酶的菌株，试验从菊芋根际土壤和叶子中通过初筛、 分离纯化和摇瓶复筛的方法筛选出一株产菊粉酶最高的菌株，并鉴定其为黑曲霉 属。然后通过紫外线诱变、微波诱变、化学试剂诱变等三种方法对所筛选出的菌 株进行诱变，最终筛选出通过微波诱变所获得的产酶活力最高的诱变株为下一步 试验菌株，测得其酶活力为 15.61U/mL，与原始出发菌株的酶活力相比提高了 78.20% 。 3. 诱变菌株黑曲霉产菊粉酶条件的研究 为了确立黑曲霉产菊粉酶条件的最优工艺参数，试验选取麸皮添加量、菊粉 添加量、蛋白胨添加量、酵母膏添加量、发酵时间、温度、pH 值、接种量等 8 个相关因素，首先通过 Plackett-Burmen 试验设计筛选出三个显著因子：麸皮添 加量(P=0.027741) 、发酵时间(P=0.029919) 、pH 值(P=0.012346) 。然后通过 Box- I 摘 要 Behnken 试验设计对三个显著因素进行响应面优化并建立和分析了各主要影响因 子与黑曲霉产酶活力关系的数学模型。试验结果显示，回归方程 p=0.0001 ﹤ 0.01 ，决定系数 R2 为 99.62% ，说明所建模型与试验值的拟合度很好。黑曲霉产 酶活力的优化工艺为麸皮添加量 4.64% ，发酵时间 81.5h，pH 值 6.0 。在此工艺 参数下，菌种产酶活力达 20.42U/mL 。与未优化前相比，菌种的产酶活力从 15.61 U/mL 增加到20.42 U/mL ，提高了30.81% 。 关 键 词：菊粉，超声提取，菊粉酶，选育，黑曲霉 论文类型：应用基础研究 II 摘 要 Subject: Research on inulinase strains breeding and its fermentation Specialty: Biochemistry and Molecular Biology Name: Zeng Xiao-Yu Supervisor: Liu Jian-Xue