佛手中2个脂肪去饱和酶基因的克隆与表达分析.pdf

摘要 低温是影响植物地域分布、限制产量的重要物理因子之一。自从Lyons提出植 物低温伤害的膜脂相变假说以来，大量实验证明生物膜脂的不饱和度与植物的抗冷 性关系密切，抗冷植物比冷敏感植物的膜脂脂肪酸不饱和度更高，脂肪酸去饱和酶 在调节膜脂的流动性来适应温度变化过程中起着关键作用。 佛手(Citrusmedica vat．sarcodactylisSwingle)原产于印度，是一种对冷胁迫较 敏感的观果植物。本研究从经冷处理的佛手突变体“矮化一叶片cDNA中克隆了2 个脂肪酸去饱和酶基因伪尚CmsFAD2与睁3CmsFAD8，分析了这2个基因在低温胁 迫下“矮化一与野生型“青皮佛手中的时空表达，以便为改良佛手低温耐性及抗 冷性分子育种提供一定的理论依据。 1．利用同源序列设计简并引物，通过RT-PCR的方法从低温处理的“矮化纾佛 和tO．3 全长序列。其中CmsFAD2全长cDNA序列共1408bp，ORF为l152bp，编码384个 共2780bp，基因结构分析发现共有7个内含子和8个外显子。 2．组织表达分析表明：to-6CmsFAD2基因在“矮化刀佛手叶中表达量较高，在 根和花中表达量较低；m-3CmsFAD8基因在“矮化佛手根、花和叶中表达量都很 低。 3．冷胁迫下的时序表达表明：随着对“矮化一与。青皮佛手苗低温处理时间 的延长，两个品种的基因表达呈现不同的模式。与对照组相比，6℃处理下的∞-6 CmsFAD2和心3 CmsFAD8基因在两个品种叶中都呈逐渐上升的表达趋势，但在抗 冷性较强的“矮化一品种中表达增加迅速且表达量较强，在抗冷性较弱的。青皮一 品种中表达增加较慢且表达量较弱。 关键词：佛手；脂肪酸去饱和酶：基因克隆：表达分析 Low which of affects distributionandlimits of temperature regional plants yield isoneofthemost factors．Since about important hypothesis plants physical phase transitionofmembrane forcauseof on number upidproposed chillinginjuryplant,alarge of demonstratedthatthe ofunsaturatedacidin experiments m锄brane degree fatty lipids is relatedto resistanceof ofunsaturatedacid closely chilling plant,thedegree fatty lipids is ine．old-resistantthanin onesand higher cold-sensitive aciddesaturases plants fatty play a rolein of acid to to shift． key regdatingpatternfatty synthesisadapttemperaaa-e