人工培育的长座虫草抗菌活性研究及其化学成分分析.pdf

II 万方数据 摘 要 长座线虫草 Ophiocordyceps longissima (Kobayasi) Sung et al.是寄生于同翅目蝉若 虫上的一种重要的虫生真菌，其无性型为长座被毛孢 本文对长座线虫草人工培养物 的抗菌活性及其化学成分进行了较为系统的研究，主要内容包括：对其无性型菌株 RCEF 3891 进行了液体和固体培养，用 4 种处理方法对人工培养子实体和液体摇瓶菌 丝体进行浸提，采用杯碟法对 6 种细菌和 1 种真菌进行抑菌试验，检测浸提物的抑菌 活性，选出指示菌，并对抑菌活性高的提取物中的活性组分进行了分离纯化和结构鉴 定；同时，测定了人工培养物的部分有效成分并应用 LC-MS 对甲醇提取物进行了成 分分析 抑菌试验结果表明：人工培养长座线虫草子实体和菌丝体的水提物和甲醇提取物 对苏云金芽孢杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌有抑菌作用，特别是对后者的抑制作用较 为明显 冬虫夏草菌丝体的水提物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和绿 脓杆菌有较弱的抑制作用，对其他供试菌物没有抑制作用 3 种人工培养物的乙酸乙 酯提取物对供试菌均没有抑菌活性 人工培养长座线虫草子实体和摇瓶菌丝体的提取 物在 80℃水浴加热后，仍具有抑菌活性，表明其抑菌活性成分有较高的耐热性 实验采用半制备型色谱柱对提取物组分进行初步分离，以抑制白色念珠菌为测定 指标对分离组分进行了活性测定，确定出一种活性组分 p-1 试验进一步用分析柱分 离，成功制备出该活性组分 经 LC-TOF-MS 和 NMR 数据解析得知，化合物 p-1 的分子式为 C H NO ，系 21 39 6 统学名为 2S ，3R，4R ，6E-2-氨基-3，4-二羟基-2-羟甲基 l-14-氧-6-二十烯酸，即为多 球壳菌素 （Myriocin ），该化合物在长座线虫草属首次发现且含量较高 对长座线虫草三种人工培养物 （子实体、固体平板菌丝体和孢梗束）的部分成分 分析结果表明：菌丝体中灰分总量最高，显著高于孢梗束和子实体中灰分的含量 长 座线虫草摇瓶菌丝体中氨基酸总量（26.68 g/100g ）、必须氨基酸总量最高（7.4g/100g ）， 显著高于孢梗束 （22.94 、8.03 g/100g）和子实体 （20.81 、7.97 g/100g ）中氨基酸、必 须氨基酸的总量 三种人工培养物的麦芽糖含量相当，差异不显著，子实体中海藻糖 和葡萄糖含量最高 通过对液体摇瓶菌丝体中多球壳菌素含量的培养优化：确定 12~15d 为最佳培养 时间，通过对五种不同液体培养基的筛选，确定出培养液Ⅴ为最优培养基；进一步对 7 种碳源和 7 种氮源的筛选，确定出麸皮和酵母粉为最佳碳源和氮源 对长座线虫草菌丝体和子实体 （混有孢梗束）的甲醇提取物成分进行了比较：含 有一些共有成分如：多球壳菌素、硬脂酸、鞘氨醇类物质；差异为菌丝体中还含有十 I 万方数据 八碳二烯酸类、神经碱等物质 除了这些成分外，子实体中的 C H N 、C H NO 、 17 19 5 22 47 5 C