噬夏孢欧文氏菌胡萝卜素合成酶相互作用及环二肽对类胡萝卜素合成调控的研究.pdf

摘 要 存在于自然界中，并且具有多种生物功能，尤其在保护人类健康方面起着重要作用。 虽然类胡萝卜素在植物和微生物中含量丰富，但从野生生物中进行单一色素的提取 和合成酶复合体的纯化都比较困难。近几年，随着不同生物类胡萝卜素合成基因的 相继克隆和合成途径中相关酶的纯化以及类胡萝卜素生物合成途径的阐明，这为阐 明类胡萝b素合成的分子机理的研究提供了便利，也为利用微生物发酵来获取特定 类胡萝卜素和运用基因工程手段调控类胡萝卜素的生物合成打下了基础。噬夏孢欧 文氏菌(Erwinia 与八氢番茄红素合成酶，本研究将编码GGPP合成酶与八氢番茄红素合成酶的基因 Superdex．75凝胶过滤层析纯化得到了一个重组蛋白复合体。Westernblotting分析结 合N．末端序列分析表明，GGPP合成酶与八氢番茄红素合成酶以两种复合体的形式 存在。 紫菌红素是类胡萝卜素的一种，荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens GcM5．1A)能累积这种类胡萝卜素。环二肽(cyclic derivatives)，荧光假单胞菌(P 嗦的衍生物(2，5．diketopiperazine fluorescens GcM5—1A)也能向胞外分泌环．(脯．酪氨酸)，前期研究发现，该菌对紫菌红素和环 ．(脯．酪氨酸)的合成存在一定的相关性。本研究探讨了环．(脯．酪氨酸)对荧光假 单胞菌细菌生长和合成类胡萝卜素的影响，同时利用SDS．PAGE研究了环一(脯．酪 氨酸)对菌体内蛋白质代谢的影响。此外，利用Western blotting检测了环一(脯．酪 氨酸)对荧光假单胞菌crtE基因的表达情况的影响。结果表明，环．(脯．酪氨酸) 对荧光假单胞菌的生长没有影响，但对类胡萝b素的合成具有促进作用；同时该化 合物对35kDa附近菌体蛋白的表达有一定的促进作用，但对crtE基因的表达没有显 著影响。 关键词：类胡萝卜素；GGPP合成酶；八氢番茄红素合成酶；环二肽 Abstract red Carotenoidsareaclassoffunctionalnatural or color．They pigmentpresentingyellow,orange have of functions in human existinthe a widely nature，andvarietybiological especiallyprotecting a and carotenoidsarerichin and of health．Although plantsmicrobes，extractionsinglepigment of fromthese areratherdifficult．Inrecent purificationsynthasecomplex organisms years，different carotenoids was inthe Was and syntheticgene cloned，relevantenzymessynthesispathwaypurified several were aconvenientforresearchof clarified，which way biosynt