壬基酚和双酚A斑马鱼(Danio rerio)精巢发育组织学及性激素合成酶基因表达影响的研究.pdfVIP

华东师范大学 摘要 环境内分泌干扰物指进入生物体内，可干扰体内内分泌物质的合成、释放、 运输、代谢等过程，激活或抑制内分泌系统的功能，破坏机体内环境的稳定，可 导致生殖障碍、出生缺陷、发育异常、代谢紊乱以及某些癌症的发生。壬基酚(NP) 和双酚A(BPA)是广泛存在水体中的环境内分泌干扰物，影响鱼类的生殖和发 育。已经有报道称内分泌干扰物对动物的精巢结构产生了影响，如能使精子质量 降低、精液量减少精子凝聚、出现卵母细胞、精巢纤维化退化等。但是对NP和 BPA调节精巢发育的分子机制以及精巢结构与分子机制相结合的研究不多。 自然条件下，鱼类精巢的发育受到体内性激素的调控，U．酮基睾酮(11．KT) 和1713雌二醇(E2)精巢合成的主要性激素。与其他脊椎动物相同，鱼类性腺 激素的合成和转化受细胞色素P450酶系的催化调节。P4501lp羟化酶(CYPllB)、 和BPA对性腺细胞色素P450酶系表达影响，是揭示环境内分泌干扰物对鱼类性 腺发育影响机制的重要途径。本文通过研究性激素合成酶基因表达的情况，研究 了环境内分泌干扰物NP和BPA对精子发育和精巢结构影响的作用途径，以期 为生物标志物筛选和环境评价提供必要的生态毒理学数据。然而野外水环境是比 较复杂的，而且环境污染物种类繁多，不可能仅存在某一种内分泌干扰物单独作 用，因此本文也研究了NP和BPA的联合效应。 在本文的研究中，我们用NP、BPA和NP+BPA对斑马鱼进行暴露，将成年 雄性斑马鱼(Danio 21d，用常规组织学方法研究试验鱼精巢组织结构的变化，用荧光定量PCR 时也测试了肝脏中卵黄蛋白原(VrG)mRNA和ERa的表达。 研究结果显示：暴露NP和BPA的斑马鱼精巢结构都有变化，随着浓度的 增加精小管中精液量减少，成熟的精子凝集，非细胞区域增加；BPA浓度为 10001．tgL1时出现了卵细胞，NP和BPA最高浓度组精巢组织都有退化现象。 mRNA的表达，出 随着NP和BPA浓度的增加诱导了肝脏中VTG和ERa mRNA的表达，所以鱼类 现了典型的雌激素效应。同时促进了精巢中CYPl9A 精巢除了VTG能作为环境雌激素的生物标志物外，CYPl9A以及ERa基因表达 华东师范大学 mRNA表达显著 变化可作为环境雌激素影响的早期预警。NP和BPA对CYPl7 下调具有负相关的剂量效应关系，但是当这两种物质联合暴露时，却促进了 CYPl7 B mRNA的表达。NP抑制了CYPII BPA对精巢AR 跟低浓度组相比性激素合成酶的表达有下调的趋势。BPA以及NP+BPA联合暴 露组都上调了FSHR 结论：(1)NP和BPA对精巢产生了影响，随着浓度的增加精小管中精液量 减少，成熟的精子凝集，非细胞区域增加，出现卵细胞。NP和BPA诱导VTG和 能抑制睾酮(T)的合成，通过诱导CYPl9A的表达，激活了内源雌激素的活性， 表达没太大影响，并且它们对AR都没影响。说明NP抑制了雄激素的合成，但 没干扰雄激素的作用。BPA对雄激素的合成没有产生影响。(4)NP和BPA的作 用机制，不完全相同，但是它们都破坏了原有的性激素平衡。(5)NP和BPA联 合作用时既存在协同作用又存在拮抗作用，NP扰乱了BPA的作用机制，联合作 用机制复杂。 CYPl9A 华东师范大学 ABSTRACT Endocrine withthe of The disruptingchemicals(EDCs)，interferencesynthesis endocrine SOthe ofactivation