壳寡糖影响小鼠其脾脏CD11 c+树突细胞免疫功能的相关研究.pdfVIP

I lc+ 壳寡糖影响小鼠及其脾脏CD 树突细胞免疫功能的相关研究 博士研究生：党一兵 指导教师：张嘉宁 教授 专业名称：生物化学与分子生物学 摘 要 自然界存在着大量具有生物活性的糖类化合物资源。以虾、蟹为原 料，经脱钙、脱蛋白、脱色及脱乙酰基反应后，运用酶生物技术和先进 胞有良好的生物兼容性，无毒，易被生物体分解，并且有多种重要的生 物学活性，如抑菌、抗氧化、抑制肿瘤、降血脂、调节免疫等。已有研 究表明，壳寡糖的结构特性，如分子量、脱乙酰度、聚合度、带电荷等 与其生物活性密切相关。不同聚合度的壳寡糖对四氯化碳造成的小鼠急 性肝损伤的保护作用不同。而不同分子量和聚合度的壳寡糖对正常小鼠 免疫功能的影响是否有所不同至今未见报道。此外，也有文献报道，壳 寡糖能激活巨噬细胞、中性粒细胞等免疫细胞，那么不同分子量和聚合 度的壳寡糖能否激活作为专职抗原提呈细胞的树突细胞目前研究尚少。 目的： 度3．7)、B．COS(平均分子量1700，聚合度7．16)对小鼠脾指数、血清 细胞因子分泌、脾脏淋巴细胞增殖，及CD4+T细胞增殖的影响，为寻找 更好的提高机体免疫力的物质提供实验依据。(2)建立一种实用、简单、 高效的分离与培养树突细胞的方法，为下一步深入研究B．COS和S-COS 对树突细胞的免疫作用奠定实验基础。 鼠脾脏CDllc+树突细胞表型、细胞因子分泌、促进T细胞增殖的影响， 及TLR4基因的调节作用。 方法： (1)应用壳寡糖B．COS和S．COS对小鼠腹腔注射，并用硫 O(Interleukin．10，IL．1 necrosis 胞因子自介素1 0)、肿瘤坏死因子Q(Tumor 法检测脾脏中淋巴细胞增殖，以及应用流式细胞仪检测脾脏中CD4+T 细胞增殖情况。 (2)应用免疫磁珠阳性分选法分离和培养小鼠脾脏 CDllc+树突细胞，并通过流式细胞仪和扫描电镜分别观察细胞表面标志 物和细胞形态，以其进行树突细胞的鉴定。 1C+树突细胞，流式细胞仪检测细胞表面分子 别作用于小鼠脾脏CDl 因子IL．1 T细胞的增殖情况；并应用RNA干扰(RNA 下调TLR4基因表达，观察其对上述指标的影响，以探索其调节机制。 结果： 1．B．COS和S．COS对小鼠免疫功能的影响 B．COS能增加正常小鼠的脾指数，增强小鼠的免疫功能，而S．COS 脏淋巴细胞增殖，结果显示B．COS能促进小鼠脾脏中淋巴细胞增殖，而 况。结果显示，S．COS和B．COS能够促进小鼠脾脏中CD4+T细胞增殖， 而Fucoidan贝lJ不能促进小鼠脾脏中CD4+T细胞增殖。 2．小鼠脾脏CDIlc+树突细胞分离鉴定 实验所采用的免疫磁珠阳性分选与密度梯度离心和细胞因子诱导相 1C+ 结合的方法分离树突细胞，能够从小鼠脾脏中成功分离、培养CDl 树突细胞，流式细胞仪检测纯度在90％以上，扫描电镜可以观察到典型 的树突细胞形态，优化了树突细胞的分离方法，所得到的树突细胞能真 实反应它在疾病当中的生物学变化，为在细胞水平研究树突细胞的表型、 功能及在各类免疫性反应中的作用机制等提供了直接的观察手段。 的介导作用 加，并且呈剂量依赖性(40，80，1 和S．COS均不能使树突细胞的IL．1 0和IFN．Y的基因表达发生明显变化。 0 和IFN．丫的分泌发生明显变化。特异性TLR4siRNA能有效下调TLR4 2 在树突细胞中的表达，为进一步研究TLR4在树突细胞中的功能提供有 作用