多倍体鱼IKK基因功能的初步研究.pdf

IllU111111UI UlllullIllUIIM Y2548341 中文摘要 天然免疫又被称之为非特异性免疫，指个体与生具有的、作用范围广、不 针对特定抗原的免疫能力。天然免疫是一种包含大量模式识别受体(PRR)的高 度复杂的快速诱导免疫反应，这些模式识别受体识别各种病原体相关分子模式 AssociatedMolecularPatterns，PAMPs)，并通过各个不同的信号通 (Pathogen 路激活机体的免疫应答。 IKK￡(inhibitorofNF．r,B 及NF．v,B(nuclearB)信号通路中的一种激酶，它是最新发现的Ir,．B factor-kappa 激酶家族(IrJ3l【inase，IKKs)的成员，最初被认定为脂多糖诱导的丝氨酸／苏 氨酸激酶。IKK￡在信号分子的作用下磷酸化Ird3a来诱导激活NF．佃，或者与 1(inause TBKl(TANK-binding factor factor 3)与IRF7(interferon7)激酶，从而诱导IFN regulatory regulatory 的分泌。 天然免疫是鱼类等低等脊椎动物的防御病害侵袭的基础，存在于哺乳动物 中的天然免疫信号通路的许多基因组分在硬骨鱼中也是保守的。目前，鱼类 TLR、RIG．I，以及MAVS基因都已经成为当今鱼类天然免疫的研究热点，然 而有关鱼类IKK￡在天然免疫中的功能研究却罕见报道。 在本论文中，我们克隆了鲤科重要经济养殖鱼类——草鱼、青鱼的IKK￡ 基因cDNA全长序列，以及二倍体／--倍体／四倍体特殊性鱼类的IKK￡基因部分 cDNA基因序列，并初步研究了青鱼IKK￡基因的功能。本论文的研究内容及 结果如下： 1． 阅读框的长度为2169bp，3’非编码区的长度为83bp，预测可编码723个氨 编码区长度为274bp，开放阅读框的长度为2169bp，3啡：编码区的长度为 86bp，预测可编码723个氨基酸，蛋白分子量为82476．9。 2． 比较青鱼与草鱼的IKKs基因的同源性得知：青鱼草鱼的IKKs基因同源性 非常高，达到了97．3％；与斑马鱼IKKs基因的序列同源性为73．4％；与哺 乳动物和鸟类的IKKs基因同源性较低。通过进化树分析也可以发现，青鱼 与草鱼的IKKs基因出现在同一个分支，符合它们同源性很高的比对结果。 对青鱼与草鱼的IKKs的氨基酸序列分析发现，两者的蛋白质序列都具有 Ird3激酶家族相似的蛋白结构域。 3． 到HEK293T细胞中，Westenblot检测到青鱼的IK．Ks基因能够在HEK293T 细胞中正常表达，并证实了其蛋白分子量大约为85KD左右。 组质粒分别转染到小鼠成纤维细胞NIH3T3以及鲤科鱼类成纤维细胞EPC 细胞中，通过免疫荧光和激光共聚焦扫描分析结果表明青鱼IKKs基因主要 在细胞质中表达。 5． 克隆了二／三倍体IKKs基因部分编码区，以及四倍体IKKs基因部分eDNA 序列。其中四倍体IKKs基因3’非编码区长度为85bp。 综上所述，本实验克隆了草鱼、青鱼的IKKs基因eDNA全长序列，并克 隆了二／三／四倍体IKKs基因cDNA的部分序列。并对青鱼IKKs基因的表达和 细胞内定位做了初步研究。本论文对将来系统研究IKKs基因在青鱼、草鱼以 及多倍体鱼天然免疫中的功能打下了基础。 关键词：IKKs，青鱼，草鱼，多倍体鱼 II ABSTRACT Theinnate isalsoknownas tothe