完全脾切除对小胰岛功能的影响及其影响机制的研究.pdf

目 录 中文摘要…………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………”4 研究论文完全脾切除对小鼠胰岛功能的影响及其影响机制的研究 前言………………………………………………………………………………………·66日IJ吾………………………………………………………………………………………’ 材料与方法…………………………………………………………”9 结果………………………………………………………………………………………·20 附图…………………………………………………………………”22 附表………………………………………………………………………………………·25 讨论………………………………………………………………………………………·27 结论………………………………………………………………………………………·25 参考文献……………………………………………………………29 综述胰岛13细胞凋亡与一氧化氮……………………………………·33 致谢…………………………………………………………………………39 个人简历…………………………………………………………………40 中文摘要 完全脾切除对小鼠胰岛功能的影晌及其影响机制的研究 摘 要 目的：胰岛p细胞的主要功能是产生和分泌胰岛素，在调节机体糖代 谢和维持正常血糖浓度过程中发挥重要作用。研究表明，其正常的生理功 能受体内多种因素的调控，涉及神经、激素及机体相关组织产生的活性因 子作用。基于临床资料和文献报道，我们推测脾在生理条件下对于胰岛p 细胞的维持和调节具有十分重要的作用。为证明这一推测，搞清脾在调节 和维持胰岛功能中的作用，我们采用完全脾切除动物模型，通过空腹血糖 分析和糖耐量试验观察小鼠胰岛功能的改变。通过胰岛的免疫组化染色、 细胞凋亡分析，观察研究胰岛功能的改变与胰岛p细胞凋亡的关系，并对 胰岛p细胞凋亡与NO水平和NOS活性测定分析，进一步探讨脾脏切除 对于胰岛p细胞的影响作用机制。 方法： 1将完全脾切除小鼠分为3个实验组，每组15只；另取正常小鼠及假手术 小鼠作为正常组和假手术组，每组45只。 2采用葡萄糖氧化酶法测定小鼠空腹血糖，采用间接放射免疫法分析血清 胰岛素。 tolerance 3采用腹腔糖耐量试验(Intraperitonealglucose test，IPGTT)坝,U定 试验末期各组小鼠糖负荷后不同时间点血糖和胰岛素的水平。 4免疫组化染色观察各组胰岛B细胞形态。 5应用ELISA试剂盒检测胰岛细胞凋亡。 6采用Dextran密度梯度离心法分离纯化完全脾切除后不同时间小鼠胰 岛，分析其NO水平矛lINOS活性。 7免疫印迹分析完全脾切除后不同时间小鼠胰腺中的iNOS表达情况。 结果： ‘ ‘ l 脾切除对各组小鼠空腹血糖的影响 6．12士0．24)与正常组(分别是4．94+0．68、5．67士0．98 中文摘要 5．63-4-0．32、5．72+0．48)相比也无统计学差异(pO．05)。 2脾切除对各组小鼠血清胰岛素水平的影响 脾切除组在实验的5、7周血清胰岛素稍有减低(31．93土2．83、 异(pO．05)。’ 3脾切除对各组小鼠糖耐量的改变 统计学差异(p0．05)。 4脾切除对小鼠胰岛组织形态的观察 免疫组化染色显示正常组和假手术组胰岛形态正常，胰岛规则，边界 清晰，细胞密集，排列整齐；脾切除组在脾切除3周边界不完整，细胞密 度没有显著改变，在脾切除5周，外周部位细胞数量明显减少，边界模糊； 在脾切除7周，没有明显边界，仅胰岛中间部位有少量细胞染色明显，细 胞数量显著减少。 5脾切除对小鼠胰岛细胞凋亡的影响 细胞凋亡的ELISA分析显示：脾切除后3周，正常小鼠、假手术组 和脾切除小鼠胰岛细胞凋亡聚集