小鼠心房细胞RR2钙释放通道对SD2通道的影响.pdf

中文摘要 小鼠心房细胞RyI迎钙释放通道对SK2通道的影响 硕士： 卢霞 导师： 章茜教授 专业： 神经生理学 郑州大学基础医学院 河南郑州450052 中文摘要 研究背景及目的 channels 生物膜离子通道(ion ofbiomembrane)是各种离子跨膜运输的通路， 它是由细胞产生的特殊蛋白质构成。生物膜对离子的通透性与多种生命活动过 程密切相关，例如，感受器电位的发生、神经兴奋与传导、各种反射活动以及 心脏搏动、平滑肌蠕动、骨骼肌收缩、激素分泌等。细胞膜离子通道有多种， 如钾通道、钠通道、钙通道、氯通道、乙酰胆碱依赖性通道等等，其中的钾通 道又包括多种：延迟整流钾通道(delayedrectifyingpotassium)，钙激活钾通道 (Calcium-activated potassiumchannal)，内向整流的钾通道(inwardlyrectifying Calcium—activated channal)是钙激活钾通道的一种，在可兴奋细胞中 potassium 发挥着重要作用，其中SK2对蜂毒明肽(apamin)比其他三种亚型敏感，具有 K+选择性，Ca2+高度敏感性和电压非依赖性等特征。SK2通道分布广泛，如中枢 神经系统、平滑肌、人和小鼠的心肌等组织，在心肌中心房肌的表达高于心室 肌。 心肌细胞SK2通道作为钙激活的钾通道对胞浆中的钙离子具有高度敏感 性，细胞内的Ca2+浓度升高时，SK2通道激活，K+外流，参与动作电位复极化 的完成，由此可见细胞内Ca2+信号对通道的激活至关重要。细胞内Ca2+来源主 Ca2+channels， 要由两条途径获得：细胞膜电压门控ca2+通道(Voltage．gated VGCCs)及内质网膜上的Ryanodine受体(ryanodinereceptors，RyRs)，后者 中文摘要 是存在于真核生物细胞肌浆V习(Sarcoplasm receptortype1)，RyR2(ryanodinetype2)和RyR3(ryanodine receptor receptortype 释放通道，通过释放SR内的Ca：十来调节细胞内的Ca：+浓度。其主要作用机制是 钙离子诱导的钙释放(Ca2+induced ca：+release，CICR)，当心肌细胞去极化时， 细胞膜上的L型Ca2+通道(L．Calcium receptor2，RyR2)结合并使其开放，导致大量的Ca：+从SR中释放入胞浆，此 过程即为钙诱导的钙释放(Ca2+．induced 心肌收缩提供肌质网Ca2+，直接参与心肌的兴奋．收缩耦联过程，IbR2的激活可 使细胞内钙离子迅速增加，其Ca2+浓度可快速增高至10倍以上。 已有工作表明心肌细胞L．型ca：+通道与SK2通道具有功能性耦联【41。 密切相关。心房细胞中RyRs．Ca2+释放通道是否影响SK2通道的功能?国内外尚 未见报道。此外，心房细胞SK通道的分子的调控途径也尚未明确。本研究对 RyRs．Ca2+释放通道是否影响心房细胞SK2通道进行了初步探讨，为进一步探讨 SK2通道的电生理功能及其与心律失常发生机制关系的研究奠定坚实的理论基 础，为临床治疗房性心律失常提供新思路。 方法 购于郑州大学实验动物中心。 2．急性分离小鼠心房细胞：将小鼠麻醉，打开胸腔行主动脉插管，主动脉根部 逆行插管成功后置于Langendorff装置上进行恒温恒速灌流。灌流液分别为无钙 台氏液，酶消化液和高钾液，酶消化液由II型胶原酶、蛋白酶、氯化钙和牛血 清白蛋白溶于无钙台氏液中所得。急性分离小鼠心脏得到单个心房细胞。 3．应用全细胞膜片钳技术记