小鼠足细胞分化征和影响因素的研究.pdf

摘要 摘要 背景：肾小球是由基底膜上系膜细胞分泌的基质支持复杂的毛细血管网构 成的高级微循环。足细胞是既有上皮细胞特点又有间叶细胞特点的一种特殊分 化细胞，在肾脏发育过程中经历了由未分化到高度分化的过程。足细胞在形成 和维持肾小球滤过膜结构中起重要作用，足细胞中存在着多种特异性标志物， 族是调控平滑肌细胞分化的关键转录因子，那么它在足细胞由增殖型到分化型 的过程中扮演了什么角色呢?G．1作为一种雌激素受体GPR30的特异性激动剂， 促进或抑制细胞的增殖。 目的：本研究检测平滑肌细胞标志基因及其相关调节因子myocardin， 胞在发育过程中与血管平滑肌细胞的相似性；讨论可以抑制血管平滑肌细胞增 殖的G．1对足细胞的作用。 方法：体外培养转基因小鼠足细胞系MPC5，选取其分化至第O、3、6、9、 1l、14天的细胞，提取RNA，用realtimePCR方法检测血管平滑肌细胞标志基 法检测G．1对足细胞增殖的影响；采取Westernblot法检测G．1对足细胞增殖相 关信号通路的影响i以及细胞周期相关蛋白在药物处理后的表达变化，进一步 探究它对足细胞增殖的作用；通过realtimePCR方法检测足细胞分化相关基因表 达变化情况，探讨其对足细胞分化的作用；足细胞在低血清饥饿后，可引起自 噬，采用Westernblot法检测G．1对足细胞LC3．II的表达水平的影响探讨其对足 细胞自噬发生的作用。 结果：足细胞在分化过程中出现平滑肌细胞分化转录因子myocardin、 MRTFSSM22a的表达：G．1可以抑制足细胞中ERK信号通路，同时细胞周期 负调控因子p27蛋白表达水平升高，PCNA表达量下调从而抑制足细胞增殖； G．1可以促进足细胞中的促平滑肌细胞分化基因MRTF．A，B的表达；G．1对足 细胞足突标志基因CD2AP的表达有促进作用，由此可以初步推断G．1对足细胞 摘要 的分化有促进保护作用；G．1可以上调LC3．II的表达水平，即自噬水平升高。 结论：足细胞表达平滑肌细胞相关基因，具有类平滑肌细胞特质；G．1可以 抑制小鼠足细胞增殖并对其分化有促进作用；G．1对足细胞在饥饿状态下的自噬 有促进作用。 关键词：足细胞，血管平滑肌细胞，G．1，ERK，CD2AP，自噬 Abstract Abstract is a microcirculationofcapillary glomeruluscomplex Background：The thematrixsecretedbasementmembrane—located network by mesangial supportedby visceral oneoftheintrinsicceilsofthe cell，is ceils．Podocyte，glomerularepithelial thathasthecharacteristics isa differentiatedcell specially glomerulus．Thepodocyte ofboth cellsand cells．Inthe of epithelial mesenchymalprocesskidneydevelopment， it the fromundifferentiatedto goesthroughprocess hi