尖孢镰刀菌拮抗菌的筛选与抗菌蛋白的分离.pdf

摘 要 摘 要 西瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌西瓜专化型（Fusariumoxysporumf.sp.niveum）侵染引 起的真菌性维管束系统病害，是西瓜生产中毁灭性的病害，给我国西瓜生产造成严重损 失，严重制约着西瓜生产的发展。 为了得到对尖孢镰刀菌有抑制作用的菌株，本实验从西瓜根际土壤中分离到346株 细菌菌株，其中菌株5-20 的活性最高。经有机溶剂萃取及盐析初步确定该菌株产生的 拮抗物质为蛋白类物质。通过对该菌株进行形态特征观察、生理生化试验以及16SrDNA 的序列比对分析，确认该菌株为Bacillusvelezensis。 对B.velezensis5-20菌株产抗菌物质的液态发酵条件进行优化，得到了抗菌蛋白的 最佳培养基组成为：玉米粉3%、蛋白胨3%、CuSO ·7H O0.05%、ZnCl 0.05%、发酵 4 2 2 液初始pH值为7.0、装量75 mL/250 mL、接种量10%、发酵时间36 h。优化前后蛋白 2 2 抑菌活性差别明显，优化之前抑菌圈面积379.94mm ，优化后为509.25mm ，活性提高 了34.03%。 芽孢是微生物菌剂的最佳制剂形式，对恶劣的环境因素的具有抗性，可延长制剂保 存期，稳定活性。对B.velezensis5-20菌株产芽孢条件进一步进行摸索，为防治西瓜枯萎 病的拮抗细菌进入工业化生产提供理论依据。产芽孢最适发酵培养基为：最佳培养基为： 玉米粉0.5%、黄豆饼粉2%、MnSO 0.3%、FeSO ·5H O0.3%；最佳培养条件为：种龄 4 4 2 18 h、接种量10%、培养基初始pH值7.0、装量75 mL/250 mL、发酵时间48 h、温度 30℃、转速220 r/min。在此优化条件下，5-20 菌株发酵液中的菌体芽孢形成率大大提高， 9 最终生物量达到2×10 cfu/mL，芽孢形成率达到96.75%。 用硫酸铵沉淀B.velezensis5-20 菌株发酵液中的蛋白质，透析、真空冷冻干燥后检 测活性，并对其性质进行了研究。该抗菌蛋白最适作用温度为25℃，在pH6.0~8.0范围 2+ 2+ 内具有较好的稳定性，最适作用pH值为7.0；Mg 、Mn 对此蛋白有明显的激活作用。 关键词 尖孢镰刀菌 Bacillusvelezensis 芽孢 优化 抗菌蛋白 分离纯化 I Abstract Abstract Abstract AAbbssttrraacctt Watermelon fusarium wilt is a fungal vascular system disease which is infested by Fusariumoxysporumf.sp.niveum.Its a devastating disease. Watermelon fusarium wilt caused serious losses to waermelon production in China.And it severely restrict the development of the watermelon production. In order to identify a strain which is effective in controlling the Fusar