核因子NF90NF45的结构生物学研究.pdfVIP

摘要 摘要 双链RNA结合蛋白在转录激活，翻译控制，mRNA的加工和细胞定位等细 胞代谢活动中起着关键作用。核因子NF90和NF45是双链RNA结合蛋白家族中 的重要成员。NF90蛋白家族成员和NF45组成异源二聚体，主要共同存在于细胞 核中。NF90／NF45的复合物作为dsRNA结合蛋白，能够和细胞内的其他蛋白质 因子结合形成复合物，共同调控基因的表达。在许多研究中发现，NF45具有增 强NF90活性的作用。 NF90／NF45复合物能够调节T细胞中白细胞介素-2(Ⅱ以)基因的表达，是 IL-2基因表达的重要调控因子，为T细胞免疫应答的调节提供了新的治疗靶点． CVirus，HCV)基因组RNA NF90／NF45的复合物调节丙型肝炎病毒(Hepatitis 的转录和复制，在HCV的生活史中起着重要的作用，为抗HCV药物的研究提供 了一个潜在的新靶点。NF90能够与流感病毒(influenzavirus)的核蛋白NP的 相互作用。NF90通过与NP的C端相互作用，抑制流感病毒基因组的复制和 mRNA的翻译。这类宿主细胞的核因子与病毒核蛋白的相互作用，是宿主细胞抗 病毒的一种重要机制。 以往的研究仅局限于核因子NF90和NF45的功能。本论文采用结构生物学方 法解析NF90和NF45的三维结构，以期能够从结构生物学角度阐述NF90／NF45在基 因表达调控和抗病毒作用中的分子机制，为药物设计和其它生物学功能的研究奠 定基础。 本论文运用原核表达系统大量表达可溶的NF90和NF45，运用亲和层析、离 子交换层析、肝素层析、凝胶过滤层析等手段纯化重组蛋白，筛选并优化蛋白质 N端片段)和NF45复合物的晶体，获得了 结晶条件，成功得至IJ-INF90N42(NF90 分辨率为2．9A的X-ray衍射数据。为解析出NF90N42／NF45蛋白质的三维结构和进 行相关的药物设计工作奠定了基础。 关键词：NF90；NF45；X射线晶体学 Vl Abstraet Abstract criticalrolesinseveral Double-stranded—RNA(dsPdqA)bindingproteinsplay ofcellular activation，translational aspects transcriptional metabolism，including mRNA control，and andlocalization．Nuclearfactor nuclear processing 90(NF90)and factor45 membersofthedsRNA fNF45)areimportant bindingproteins ofNF90andNF45formaheterodimerandarc family．Membersfamily predominantly localizedinthenucleusandinteractwithother inthecellto proteins regulategene isfoundthatthedsRNA is associatedwith expression．It bindingpropertydi