水稻镉诱导启动的分离和功能分析.pdfVIP

摘要 摘 要 水稻是我国主要的粮食作物之一，随着工农业的发展，环境和土壤中的重金 属，特别是重金属镉，在水稻各个组织积累，影响水稻的产量和品质。镉在环境 中不能降解，可通过食物链严重危害人类的健康。降低和消除镉污染成为一个亟 待解决的问题。通过换土、优化水肥或者全生育期淹水等措施都可以缓解镉对水 稻的毒害，降低稻米中的镉含量，但这会大大增加种植成本。因此，从遗传上改 良水稻品种的耐镉性，选育镉积累量低的品种，是减少稻米镉污染的一个经济且 有效的途径。 植物主要的应激反应是基因表达的转录调控，这主要取决于启动子和转录因 子之间的相互作用。诱导型启动子只在特定环境下表达，可避免目的基因的过量 表达对植物的伤害。因此，诱导型启动子为研究胁迫耐受性的调控机制提供了重 要资源。而且，目前主要集中在对功能基因的研究，对水稻镉诱导启动子的研究 很少，本文我们鉴定和分离了水稻中三个代表性的响应镉的启动子，并对其活性 进行了分析。具体实验结果如下： (1)通过基因芯片分析和qRT-PCR鉴定，找出三个主要受到重金属镉诱导表达 的基因，分别为OsGSTU37、OsHSPl8．6和OsGSTU5。 6 (2)克隆上述的3个水稻镉响应基因的启动子，分别命名为Po．，Gsrv37、PO，HSPl8 和POsGSTU5。构建了这三个启动子与GUSplus报告基因的融合表达载体，通过农 杆菌介导的水稻遗传转化获得20、25和27株阳性转基因水稻植株。 进行定性和定量分析。通过对相应启动子的T3代转基因植株的根、茎、叶组织 进行GUS化学染色，与未处理相比，镉诱导后其根、茎、叶组织都有不同程度 的着色，表明这三个启动子是镉强诱导启动子。同时，对3个启动子POsGSTU37、 受镉诱导24h后的活性和组成型启动子Po叫c删的活性相当，POsHSPl8．6表现出比 Po叫c删更高的镉诱导活性，叶组织镉诱导倍数为POsACTIN的1．33倍，根的镉诱 导倍数为P鲫c删的5．38倍。 万方数据 水稻镉诱导启动子的分离与功能分析 现出不同的镉诱导应答模式。随着镉诱导时间的延长，PosGsru3，的活性不断增加， 在72h时达到最高，是未诱导的880倍。PosHsP，a6活性在镉诱导初期受到强烈 的上调表达，8h诱导倍数最高，约为1220．8倍，后随着时间增加其诱导活性不 断降低。Poscsrv5的本底表达水平较高，4h的镉诱导倍数达24倍。随后镉诱导 活性保持在一个相对稳定的水平。 (5)定量分析了三个镉诱导启动子在长期低浓度镉诱导下的表达模式，得出 POsGSTU5和P伪岱础7根组织的活性显著高于叶组织中的，这可能是由于水稻不 同组织镉积累浓度不同造成的。POsGSTU37驱动的GUSplus的表达水平随着镉胁 基因植株GUSplus的表达水平不依赖于镉胁迫时间的长短而增加。与4天未经 倍数最高，Po，HspJ丑65天的叶子诱导倍数最高。 基冈植株的诱导活性。Ni诱导下，Po，Gsru5转基因植株的GUSplus的诱导表达量 调表达，而金属Cu、Fe、Zn、Mn和Co对其诱导表达量很低。金属Ni、Cu、 Po,脚旭6与阴性对照相比，各种金属都强诱导其转基因植株GUSplus的表达，其 (7)分别对三个镉诱导启动子进行功能分析，构建了3个镉诱导启动子相应的 截断启动子与GUSplus报告基因的融合表达载体。并对三个镉诱导启动子的镉 响应元件进行了初步分析，Po,,Gsrv5镉响应元件定位在-2240-一1572 bp，POsGSTU37 各截断启动子均有诱导，POsHSPI6镉响应元件定位至-437--190bp。 本论文发现并鉴定了三个镉诱导启动子，分别对这三个镉诱导启动子进行定