深海宏基因组文活性物质筛选及深海真菌活性物质的筛选和研究.pdfVIP

摘要 摘要 海洋是地球最重要的生态系统之一。由于海洋尤其是深海生态环境的特殊 性，深海微生物具有一些特异的代谢途径和遗传背景，深海微生物次生代谢产物 具有化学结构奇特、新颖，生物活性多样等特点。对深海微生物尤其是极端环境 微生物的研究开发将会在工业、医药、环境保护等方面具有潜在的、巨大的应用 价值。 微生物蕴藏着巨大的菌种与基因资源，但仅有0．1％～1％的微生物在现有技 术条件下能够培养。宏基因组技术避开了微生物培养和分离，极大地扩展了微生 物资源的利用空间，是开发利用未培养和非培养微生物的有效途径。 本文以“亚特兰蒂斯”号科考船于2009年11月在墨西哥California海湾瓜伊马 斯深海热液口所采集的样品和中国大洋一号第20航次采集的深海沉积物样品为 材料，构建3个高质量的环境文库和6个富集样品文库。从其中4个富集样品宏基 因组文库12500个克隆子中得到17株产生颜色的克隆子。对这17株产颜色的克隆 子的乙酸乙酯萃取粗提物浸膏，分别进行了细胞毒活性和抗真菌活性的筛选。实 验表明，这17株克隆子都具有不同程度的抗真菌活性，而其中ll株具有不同程度 的细胞毒活性。 对其中5株产生红色物质的克隆子做了转宿主、插入突变研究，发现宿主红 色物质的产生是由于外源基因的表达。突变子测序结果表明，这5株克隆子都含 有与芳香族降解有关的基因簇。其中，2个克隆子(7F12和17F9)可产生水溶性 棕黑色色素，突变子测序结果表明两株克隆子中，水溶性棕黑色色素的产生与 4HPPD酶(4-Hydroxyphenylpyruvatedioxygenase)有关。 测序分析发现，17F9包含4HPPD基因和调控因子TyrR；7F12全长测序结果 bacterium 表明，基因11为也包含4HPPD酶，编码348氨基酸，与Alteromonadales TW二7(348氨基酸)97％同源。 另一方面，本文利用中国大洋一号第20航次采集的深海沉积物样品进行了真 菌富集分离和鉴定。从27份深海沉积物样品中分离出110株真菌，分属于15个属。 利用CCK8法对其中的100株深海真菌进行了抗肿瘤活性检测，发现深海真菌具有 摘要 良好的生物活性，细胞毒阳性率占49％。其中GYP培养基条件下有36株表现出抗 肿瘤活性，PDA培养基条件下有34株表现出抗肿瘤活性。同时，不同培养基条件 真菌粗提物活性也表现出明显差别。该研究为后期分离鉴定深海真菌产生的生物 活性化合物奠定了良好基础。 关键词：微生物资源；宏基因组；活性物质 Ⅱ Abstract Abstract the of Marineistheofmost in earth．Because important particularity ecosystem ofmarine somecharacteristic especiallydeep-sea,themicroorganismpossesses metabolic metabolic havethe background．Andsecondary pathwaygenetic products characteristicof andnovelchemicalconstruction．Itis and