用报告基因和嫁系统研究棉花抗黄萎病机理.pdfVIP

摘要 摘要 dahliae)引起的棉花黄萎病是一种典型的维管束病 大丽轮枝菌(Verticillium 害，黄萎病在我国大部分棉区普遍发生，很难防治，而且病害的发生会导致棉 花产量下降和品质降低。本研究将绿色荧光蛋白编码基因导入大丽轮枝菌，用 大丽轮枝菌侵染经过不同嫁接处理的棉花植株根部，利用荧光定量PCR、荧光 显微镜观察和激光共聚焦显微镜观察等技术，观察大丽轮枝菌在棉花植株体内 的侵染和定殖情况，分析不同嫁接处理中，黄萎菌在棉花感病品种和棉花抗病 品种中定殖和扩展的差别，为进一步揭示棉花抗黄萎病的机理提供理论依据。 本论文采用CaCl2．PEG介导的原生质体法，将构建好的携带有绿色荧光蛋 白GFP基因的真菌表达载体转化进大丽轮枝菌VD．25中，得到81个阳性转化 菌株，并对菌株的生物学特性、荧光强弱、遗传稳定性、致病力等生理生化指 标进行检测，筛选到荧光信号强，且能够稳定遗传的转化菌株(325．35，该菌株 的生物学特征和致病力与原始菌株相似，可代表原始菌株用于后续的侵染研究。 将携带GFP标记的大丽轮枝菌分别侵染棉花抗病品种海7124和感病品种 冀棉11，在不同时间点取抗、感病品种根部及茎基部组织，分别置于荧光显微 镜和激光共聚焦显微镜下，观察黄萎菌对感病品种和抗病品种的入侵及扩展动 态。结果表明，大丽轮枝菌侵染棉花根部后的不同时期，病原菌对抗病品种和 感病品种根部组织的侵染效果无明显差异，并且对不同抗病类型棉花的初始侵 染位点也无明显差异，但是与抗病品种相比，吸附在感病品种根部的分生孢子 的萌发时期明显较早，病原菌对感病品种维管组织的侵染速度也更快。 此外，本研究选用对黄萎病表现不同抗性的棉花品种，待棉苗长出1~2片 真叶时，应用相互嫁接的方法将抗病和感病品种材料组合在一起，构建出相互 嫁接苗抗／感和感／抗，以及自身嫁接苗感／感和抗／抗嫁接棉花材料，并以非嫁接 的自根苗为对照，经人工接种大丽轮枝菌后，调查棉花材料的发病情况，并使 用荧光定量PCR技术检测棉花体内不同部位病原菌的含量。结果表明：自身嫁 接苗与自根苗抗性差异不显著；相互嫁接植株抗／感和感／／7E组合抗病效果明显强 于感／感组合，但较抗／抗组合抗病性下降；不同抗性品种不同部位内黄萎菌的定 殖量存在差异，感病品种冀棉11各部位IC值显著高于其他品种，且由下向上依 次增大，抗病品种海7124和Pima90茎基部IC值最大向上减小；抗病材料无论 摘要 作砧木还是接穗，均对棉花黄萎菌有抑制作用，全株体现抗性，但对接口以下 茎部的抑制作用要大于接口以上的茎部和叶片等组织。 关键词：棉花；黄萎病；大丽轮枝菌；绿色荧光蛋白；嫁接；荧光定量PCR： 激光共聚焦显微观察；荧光显微观察；抗病性 Ⅱ Abstract Verticillium Verticillium a vascular Cotton dahliae，is wiIt,caused typical by isalsothemost to andtreatment disease，and common,difficult systemic prevention diseasein thisdiseasealsorestrictsthe and ofcotton China,and yieldquality directly． Inthis vector GFP WastransformedintoVerticillium