粟酒裂殖酵母Tz1p核定位序列的进一步研究.pdfVIP

摘要 摘 要 tRNase 酸序列，促进tRNA3’末端加工成熟。tRNase Z属于金属．p．内酰胺酶家族，在生物体 中tR．NaseZ有短型(tRNase 不同数量不同类型的tR．Nasc Z。本课题主要涉及的研究是粟酒裂殖酵母 Z基因的相关功能研究。 在裂殖酵母(S．pombe)中编码有两个tRNase 白的融合蛋白，观察这些融合蛋白的荧光信号分布情况，分析确定各个融合蛋白的核 定位序列的细胞定位。实验发现含有2鸺KK．R．K2n的融合蛋白明显的分布在细胞核中， 不含这四种氨基酸的融合蛋白的荧光信号散布在细胞核和细胞质中，说明trzl+基因 sptrzl+基因的细胞定位是在细胞核，其功能的发挥主要是在细胞核中进行。同时，采 用合成寡核苷酸的方法结合截短片段的分析，进一步确定裂殖酵母sptrzl+基因中 KKRK只有一个核定位序列，其序列分布存在该基因的N端，并且可以初步确定 FKKRK}玎孙T腿G是其核定位序列。 3·端 基因定位在线粒体，本课题期望通过研究sptrz2+基因的功能，对线粒体的tRNA 加工方式有一定的突破。课题设计利用sptrz2+基因温度敏感型菌株，比较温度敏感型 殖酵母线粒体tRNA加工方式。 裂殖酵母与细胞凋亡相关的基因pcdl+可能参与细胞凋亡，进一步研究发现其不 参与细胞凋亡，参与细胞周期，与细胞发育有关，因此我们希望进一步研究裂殖酵母 方法来构建由弘川+基因引起的温度敏感型菌株。但遗憾的是经过一定数量的温度敏 感型菌株筛选，没有得到特别适合课题需要的温度敏感菌株，为今后筛选温度敏感突 变菌株的合适条件探索莫定了一定的基础。 关键词：核酸内切酶tRN弱eZ：绿色荧光蛋白(GFP)；粟酒裂殖酵母；温度敏感突 变菌株 Abstract EndonucleasetRNaseZ the ofthe catalyzes mature3’endoftRNA generation precursorsthroughspecific Z to endonucleolyticcleavage．tRNase enzymesbelong the of allkinds super-family of metallo—p—lactamases(MBL)．Inorganisms，tR_Nase Zcanbe dividedinto short longform(tRNaseZL)and are form(tRNase Zs)．There differentkindsandnumbers oftRNaseZsindifferent organisms．Thissubject focusesonthe mainly