仙鹤草红外光谱析及其鞣质抗肿瘤作用研究.pdfVIP

摘要 摘要 Pilosa 仙鹤草(AgrimoniaLedeb)为蔷薇科多年生草本植物龙芽草的全草。传统主要 用于治疗各种出血证，现代研究证明，仙鹤草还有抗肿瘤、降血糖、升压等作用。仙鹤 草中鞣质类成分含量丰富，且鞣质的研究也日益受到国内外科研工作者的重视。本文首 次采用傅立叶变换红外光谱法(FT-IR)对仙鹤草进行分析，对其鞣质成分进行体内、体外 抗肿瘤作用研究，并初步探讨其作用机理。 红外光谱研究结果表明，通过帽儿山仙鹤草主体成分红外图谱对比分析可知，仙鹤 cm～、1569cm～、1168 草在1659 cmo和989cmd处有4个鞣质特征峰，并且在1643 cm一、1512 cm以和1470cm。1波长附近也存在鞣质特征峰，说明仙鹤草中含有鞣质成 分；通过红外光谱的三级鉴定可知，七种产地仙鹤草丙酮提取物乙酸乙酯和正丁醇层均 含有鞣质成分，且鞣质量不同，并通过对其原药材和提取物的分析可将七种产地的仙鹤 草区分开；通过对不同提取物的乙酸乙酯层和正丁醇层一维红外光谱和二阶导数红外光 谱分析可知，不同提取物的乙酸乙酯层和正丁醇层中均含有鞣质成分，但鞣质量不同， 只有以丙酮作为提取溶剂时才能充分提取出鞣质成分；通过乙酸乙酯层和正丁醇层精制 前后的一维红外光谱和二阶导数红外光谱与单宁酸标准图谱对比分析可知，经过精制制 备后，可以不同程度的提高样品的纯度；采用经干酪素法测定精制制备后的仙鹤草丙酮 提取物乙酸乙酯层和正丁醇层的平均鞣质含量分别为19．91％和14．87％。所以，傅立叶 变换红外光谱法作为鉴别不同产地的仙鹤草是一种有效的手段，且为仙鹤草利用红外光 谱创建指纹图谱打下了基础。 体内抗肿瘤实验结果表明，乙酸乙酯层和正丁醇层均可以抑制Sl∞小鼠实体瘤的生 长，与阴性组相比，各给药组具有显著性差异(P0．05)，均表现出良好的抑瘤作用， 200 mg／kg的乙酸乙酯层的抑瘤率为50．44％，250mg，I(g的正丁醇层的抑瘤率为57．52 ％；乙酸乙酯层和正丁醇层各剂量组均能不同程度的升高Siso小鼠胸腺指数和脾指数， 对荷瘤小鼠两大免疫器官具有良好的保护作用；仙鹤草丙酮提取物乙酸乙酯层和正丁醇 乙酸乙酯层和正丁醇层能够明显的提高荷瘤小鼠抗氧化系统的功能。抑制脂质过氧化， 清除体内过剩的氧自由基，进而发挥抗肿瘤作用，且乙酸乙酯层的作用优于正丁醇层， 仙鹤草的抗肿瘤作用可能通过抗氧化作用实现的，这也可能足其体内抗肿瘤作用机理之 一● 由体外抗肿瘤实验结果可知，乙酸乙酯层和正丁醇层均可显著抑制BEL．7402细胞 和HepG2细胞的生长，并随着药物浓度的增大而增强，作用较明显。乙酸乙酯层对 BEL-7402细胞的IC50为89．28 pg／mL，对HepG2细胞的IC50为127．85 pg／mL，正丁醇 层对BEL-7402细胞的ICso为107．54 酸乙酯层的作用明显强于正丁醇层；通过流式细胞仪(FCM)进一步检测可知，乙酸乙 东北林qp人学博士学位论文 酯层和正丁醇层均能诱导BEL．7402细胞和HepG2细胞发生细胞凋亡，且作用较明显： 通过激光共聚焦显微镜检测可知，不同浓度的乙酸乙酯层和正丁醇层作用于BEL．7402 h后，肿瘤细胞明显减少，均不同程度的出现细胞核裂解，出现 细胞和HepG2细胞48 较明显的凋亡形态，且有明显的绿色荧光，表明肿瘤细胞内游离Ca：+水平升高；不同浓 h后，细胞内活性 度的乙酸乙酯层和正丁醇层作用于BEL．7402细胞和HepG2细胞48 氧(ROS)均随给药剂量的增加而增加，与空白组相比，均具有显著性差异 7402细胞和HepG2细胞发生细胞凋亡，这也许是其体外抗肿瘤作用的机理之一。 本文首次采用FT-IR对仙鹤草进行了分析，为其利用红外光谱创建指纹图谱奠定基 础，并能确定仙鹤草丙酮提取物乙酸乙酯层和正丁醇层中均含有一定量的鞣质成分，且